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专注多肽 服务科研
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GDDDDK-βNA，用于测定肠肽酶（肠激酶）的特异性底物，也用于组织化学。
编号：200125
CAS号：70023-02-8
单字母：H2N-GDDDDK-βNA
| 编号: | 200125 |
| 中文名称: | Gly-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys-β naphtylamide 、Gly-(Asp)4-Lys-β naphtylamide |
| 英文名: | Gly-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys-β naphtylamide 、Gly-(Asp)4-Lys-β naphtylamide |
| 英文同义词: | Gly-(Asp)4-Lys-βnaphtylamide |
| CAS号: | 70023-02-8 |
| 单字母: | H2N-GDDDDK-βNA |
| 三字母: | H2N N端氨基：N-terminal amino group。在肽或多肽链中含有游离a-氨基的氨基酸一端。在表示氨基酸序列时，通常将N端放在肽链的左边。 -Gly甘氨酸：glycine。系统命名为 2-氨基乙酸。是编码氨基酸中没有旋光性的最简单的氨基酸，因具有甜味而得名。符号：G，Gly。 -AspL-天冬氨酸：aspartic acid。系统命名为(2S)-氨基-丁二酸。是编码氨基酸，又是神经递质。符号：D，Asp。D-天冬氨酸存在于多种细菌的细胞壁和短杆菌肽A中。 -AspL-天冬氨酸：aspartic acid。系统命名为(2S)-氨基-丁二酸。是编码氨基酸，又是神经递质。符号：D，Asp。D-天冬氨酸存在于多种细菌的细胞壁和短杆菌肽A中。 -AspL-天冬氨酸：aspartic acid。系统命名为(2S)-氨基-丁二酸。是编码氨基酸，又是神经递质。符号：D，Asp。D-天冬氨酸存在于多种细菌的细胞壁和短杆菌肽A中。 -AspL-天冬氨酸：aspartic acid。系统命名为(2S)-氨基-丁二酸。是编码氨基酸，又是神经递质。符号：D，Asp。D-天冬氨酸存在于多种细菌的细胞壁和短杆菌肽A中。 -LysL-赖氨酸：lysine。系统命名为(2S)-6-二氨基已酸。是编码氨基酸中的碱性氨基酸，哺乳动物的必需氨基酸。在蛋白质中的赖氨酸可以被修饰为多种形式的衍生物。符号：K，Lys。 -βNA2-萘胺 |
| 氨基酸个数: | 6 |
| 分子式: | C34H44N8O14 |
| 平均分子量: | 788.76 |
| 精确分子量: | 788.3 |
| 等电点(PI): | 3.9 |
| pH=7.0时的净电荷数: | -2.02 |
| 平均亲水性: | 3 |
| 疏水性值: | -3.05 |
| 消光系数: | - |
| 来源: | 人工化学合成，仅限科学研究使用，不得用于人体。 |
| 储存条件: | 负80℃至负20℃ |
| 标签: | 未分类肽 |
GDDDDK-βNA, specific substrate for the determination of enteropeptidase (enterokinase), also used in histochemistry.
H-Gly-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys-bNA trifluoroacetic acid is a peptide that is used as a biocatalyst in the production of microspheres. It is also known as enterokinase, and cleaves proteins at their N termini. This enzyme has been immobilized on silica gel and then applied to the production of microspheres. The half life of this enzyme is 1 hour at 37°C, but it can be increased to 8 hours by immobilizing it on silica gel using glutaraldehyde. HGAASDAAKLysBNAtrifluoroacetic acid has been shown to have a high specific activity with an efficiency of 60% and a pH range between 4 and 10. It has been shown to have high protein cleavage rates at 30°C, 37°C, and 40°C, with bovine serum albumin being the
该多肽是肠激酶底物。肠激酶又称肠肽酶，是一种膜结合丝氨酸内肽酶，通过切割并激活胰蛋白酶原启动胰腺水解酶的活化。肠肽酶存在于十二指肠。经胰蛋白酶激活并切割该底物后，也可检测到前肠肽酶。
This peptide is an enterokinase substrate. Enterokinase, also known as enteropeptidase, is a membrane-bound serine endopeptidase that initiates the activation of pancreatic hydrolases by cleaving and activation of trypsinogen. Enteropeptidase is present in the duodenum. Proendopeptidase may be also detected after activation with trypsin and cleavage of this substrate.
H-Gly-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys-βNA 别名 GDDDDK-βNA，是测定肠肽酶(enteropeptidase)时的一个特异性底物，H-Gly-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys-βNA也被用在组织化学中。
| DOI | 名称 | |
|---|---|---|
| 10.1016/j.bbapap.2006.04.015 | Compatible solutes as protectants for zymogens against proteolysis | 下载 |
| 10.1016/0005-2744(79)90187-6 | Hydrolysis of artificial substrates by enterokinase and trypsin and the development of a sensitive specific assay for enterokinase in serum | 下载 |
| 10.1007/BF00489503 | Histochemical demonstration of enteropeptidase activity. New method with a synthetic substrate and its comparison with the trypsinogen procedure | 下载 |
| 10.1016/0009-8981(80)90057-1 | The application of a new synthetic substrate to the determination of enteropeptidase in rat small intestine and human intestinal biopsies | 下载 |
多肽H2N-Gly-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys-βNA的合成步骤：
1、合成CTC树脂：称取1.1g CTC Resin（如初始取代度约为0.56mmol/g）和0.74mmol Fmoc-Lys(Boc)-OH于反应器中，加入适量DCM溶解氨基酸（需要注意，此时CTC树脂体积会增大好几倍，避免DCM溶液过少），再加入1.85mmol DIPEA（Mw：129.1,d：0.740g/ml），反应2-3小时后，可不抽滤溶液，直接加入1ml的HPLC级甲醇，封端半小时。依次用DMF洗涤2次，甲醇洗涤1次，DCM洗涤一次，甲醇洗涤一次，DCM洗涤一次，DMF洗涤2次（这里使用甲醇和DCM交替洗涤，是为了更好地去除其他溶质，有利于后续反应）。得到 Fmoc-Lys(Boc)-CTC Resin。结构图如下：
2、脱Fmoc：加3倍树脂体积的20%Pip/DMF溶液，鼓氮气30分钟，然后2倍树脂体积的DMF 洗涤5次。得到 H2N-Lys(Boc)-CTC Resin 。（此步骤脱除Fmoc基团，茚三酮检测为蓝色，Pip为哌啶）。结构图如下：
3、缩合：取1.85mmol Fmoc-Asp(OtBu)-OH 氨基酸，加入到上述树脂里，加适当DMF溶解氨基酸，再依次加入3.7mmol DIPEA，1.76mmol HBTU。反应30分钟后，取小样洗涤，茚三酮检测为无色。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂。（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。得到Fmoc-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-CTC Resin。氨基酸：DIPEA：HBTU：树脂=3：6：2.85：1（摩尔比）。结构图如下：
4、依次循环步骤二、步骤三，依次得到
H2N-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-CTC Resin
Fmoc-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-CTC Resin
H2N-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-CTC Resin
Fmoc-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-CTC Resin
H2N-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-CTC Resin
Fmoc-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-CTC Resin
H2N-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-CTC Resin
Fmoc-Gly-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-CTC Resin
以上中间结构，均可在专肽生物多肽计算器-多肽结构计算器中，一键画出。
最后再经过步骤二得到 H2N-Gly-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-CTC Resin，结构如下：
5、N端临时Boc保护：加适当DMF到树脂中，再依次加入7.39mmol DIPEA，3.7mmol Boc酸酐溶液，鼓氮气反应30分钟。取小样茚三酮检测为无色。Boc酸酐：DIPEA：树脂=6：12：1（摩尔比）。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。 得到 Boc-Gly-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-CTC Resin。结构如下：
6、全保护切割：配置0.5%TFA/DCM溶液，溶液体积约为树脂体积的3倍。再次用DCM洗涤树脂2遍（去除残留DMF），后将配置好的溶液倒入到反应器中，反应30分钟。抽滤树脂，收集滤液（此时多肽已经从树脂上分离，存在于滤液中）。多肽序列为 Boc-Gly-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-CTC Resin。 在滤液中添加DIEPA，调PH至7-8。用饱和NaHCO3洗涤滤液，分离出DCM层溶液。可适当旋蒸DCM层溶液，减少有机溶剂。再次加入1或2倍体积的乙酸乙酯，用稀HCl溶液调PH至微酸性，将多肽从DCM层萃取到乙酸乙酯层。用饱和NaCl洗涤2次乙酸乙酯层。用无水硫酸镁吸收乙酸乙酯层的水分。通过减压旋蒸，直接将乙酸乙酯完全旋蒸掉，得到晶体状固体多肽，用于下一步C端反应。或通过减压旋蒸保留适量乙酸乙酯的溶液体积，加入冰乙醚析出 多肽，然后对多肽进行烘干操作即可用于下一步C端反应。Boc-Gly-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-COOH的结构图如下。
7、2-萘胺反应连接：在上述树脂中，加入适当DMF后，再加入1.85mmol 2-萘胺到树脂中，再加入3.7mmol DIPEA、1.76mmol HBTU，鼓氮气反应30分钟。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。 得到 Boc-Gly-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-βNA。 结构如下：
8、切割：6倍树脂体积的切割液（或每1g树脂加8ml左右的切割液），摇床摇晃 2小时，过滤掉树脂，用冰无水乙醚沉淀滤液，并用冰无水乙醚洗涤沉淀物3次，最后将沉淀物放真空干燥釜中，常温干燥24小试，得到粗品H2N-Gly-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys-βNA。结构图见产品结构图。
切割液选择：1）TFA：H2O=95%：5%
2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%
3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5%：5%：2.5%：2.5%：2.5%
（前两种适合没有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三种适合几乎所有的序列。）
9、纯化冻干：使用液相色谱纯化，收集目标峰液体，进行冻干，获得蓬松的粉末状固体多肽。不过这时要取小样复测下纯度 是否目标纯度。
10、最后总结：
杭州专肽生物技术有限公司（ALLPEPTIDE https://www.allpeptide.com）主营定制多肽合成业务，提供各类长肽，短肽，环肽，提供各类修饰肽，如：荧光标记修饰（CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等），功能基团修饰肽（叠氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等），同位素标记肽（N15、C13），订书肽（Stapled Peptide）,脂肪酸修饰肽（Pal、Myr、Ste），磷酸化修饰肽（P-Ser、P-Thr、P-Tyr），环肽（酰胺键环肽、一对或者多对二硫键环），生物素标记肽，PEG修饰肽，甲基化修饰肽等。
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