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CALP3 是一种类似于 Ca2+ 的肽，是有效的 Ca2+ 通道阻滞剂，可激活 Ca2+ 结合蛋白的 EF 手。CALP3 可以通过调节钙调蛋白 (CaM)，Ca2+ 通道和泵的活性来模拟增加的 [Ca2+]i。CALP3 具有控制诸如艾滋病或由于缺血引起的神经元丢失等疾病中细胞凋亡的潜力。

CALP3, a Ca2+-like peptide, is a potent Ca2+ channel blocker that activates EF hand motifs of Ca2+-binding proteins. CALP3 can functionally mimic increased [Ca2+]i by modulating the activity of Calmodulin (CaM), Ca2+ channels and pumps. CALP3 has the potential in controlling apoptosis in diseases such as AIDS or neuronal loss due to ischemia.

CALP3醋酸盐是一种强效的Ca2+通道阻滞剂，通过调节钙调素（CaM）、Ca2+通道和泵的活性来模拟[Ca2+]i的增加。CALP3是一种细胞可渗透的钙调素（CaM）激动剂，与EF手/Ca2+结合位点结合。

CALP3 acetate is a potent Ca2+ channel blocker that mimics [Ca2+]i increase by regulating the activity of calmodulin (CaM), Ca2+ channels, and pumps. CALP3 is a cell-permeable calmodulin (CaM) agonist binding to the EF-hand/Ca2+-binding site.

CALP3是一种钙样肽，包含CALP2的前八个残基，CALP2是一种12个残基的肽，在没有钙的情况下与人钙调素中的EF手基序4相互作用以激活它。在培养的大鼠新皮层神经元中，它作为钙通过谷氨酸受体通道流入的细胞可渗透抑制剂，IC50为37.25µM。它还以50.97µM的IC50抑制兴奋性细胞毒性，以33.41µM的IC 50抑制细胞凋亡。CALP3作为一种新型的Ca2+通道阻断剂，靶向Ca2+传感器，阻止Ca2+介导的细胞凋亡。

CALP3 is a calcium-like peptide that contains the first eight residues of CALP2, which is a 12-residue peptide that interacts with EF hand motif 4 in human calmodulin to activate it in the absence of calcium. It acts as a cell-permeable inhibitor of calcium influx through glutamate receptor channels in cultured rat neocortical neurons with IC50 of 37.25 µM. It also inhibits excitatory cytotoxicity with IC50 of 50.97 µM and apoptosis with IC50 of 33.41 µM. CALP3 was used to study as a new type of Ca2+ channel blocker that targets Ca2+ sensors and prevents Ca2+-mediated apoptosis.

多肽H2N-Val-Lys-Phe-Gly-Val-Gly-Phe-Lys-COOH的合成步骤：

1、合成CTC树脂：称取2.79g CTC Resin（如初始取代度约为0.74mmol/g）和2.48mmol Fmoc-Lys(Boc)-OH于反应器中，加入适量DCM溶解氨基酸（需要注意，此时CTC树脂体积会增大好几倍，避免DCM溶液过少），再加入6.19mmol DIPEA（Mw：129.1,d：0.740g/ml），反应2-3小时后，可不抽滤溶液，直接加入1ml的HPLC级甲醇，封端半小时。依次用DMF洗涤2次，甲醇洗涤1次，DCM洗涤一次，甲醇洗涤一次，DCM洗涤一次，DMF洗涤2次（这里使用甲醇和DCM交替洗涤，是为了更好地去除其他溶质，有利于后续反应）。得到  Fmoc-Lys(Boc)-CTC Resin。结构图如下：

2、脱Fmoc：加3倍树脂体积的20%Pip/DMF溶液，鼓氮气30分钟，然后2倍树脂体积的DMF 洗涤5次。得到 H2N-Lys(Boc)-CTC Resin 。（此步骤脱除Fmoc基团，茚三酮检测为蓝色，Pip为哌啶）。结构图如下：

3、缩合：取6.19mmol Fmoc-Phe-OH 氨基酸，加入到上述树脂里，加适当DMF溶解氨基酸，再依次加入12.39mmol DIPEA，5.88mmol HBTU。反应30分钟后，取小样洗涤，茚三酮检测为无色。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂。（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。得到Fmoc-Phe-Lys(Boc)-CTC Resin。氨基酸：DIPEA：HBTU：树脂=3：6：2.85：1（摩尔比）。结构图如下：

4、依次循环步骤二、步骤三，依次得到

H2N-Phe-Lys(Boc)-CTC Resin

Fmoc-Gly-Phe-Lys(Boc)-CTC Resin

H2N-Gly-Phe-Lys(Boc)-CTC Resin

Fmoc-Val-Gly-Phe-Lys(Boc)-CTC Resin

H2N-Val-Gly-Phe-Lys(Boc)-CTC Resin

Fmoc-Gly-Val-Gly-Phe-Lys(Boc)-CTC Resin

H2N-Gly-Val-Gly-Phe-Lys(Boc)-CTC Resin

Fmoc-Phe-Gly-Val-Gly-Phe-Lys(Boc)-CTC Resin

H2N-Phe-Gly-Val-Gly-Phe-Lys(Boc)-CTC Resin

Fmoc-Lys(Boc)-Phe-Gly-Val-Gly-Phe-Lys(Boc)-CTC Resin

H2N-Lys(Boc)-Phe-Gly-Val-Gly-Phe-Lys(Boc)-CTC Resin

Fmoc-Val-Lys(Boc)-Phe-Gly-Val-Gly-Phe-Lys(Boc)-CTC Resin

以上中间结构，均可在专肽生物多肽计算器-多肽结构计算器中，一键画出。

最后再经过步骤二得到 H2N-Val-Lys(Boc)-Phe-Gly-Val-Gly-Phe-Lys(Boc)-CTC Resin，结构如下：

5、切割：6倍树脂体积的切割液（或每1g树脂加8ml左右的切割液），摇床摇晃 2小时，过滤掉树脂，用冰无水乙醚沉淀滤液，并用冰无水乙醚洗涤沉淀物3次，最后将沉淀物放真空干燥釜中，常温干燥24小试，得到粗品H2N-Val-Lys-Phe-Gly-Val-Gly-Phe-Lys-COOH。结构图见产品结构图。

切割液选择：1）TFA：H2O=95%：5%、TFA：H2O=97.5%：2.5%

2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%

3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5%：5%：2.5%：2.5%：2.5%

（前两种适合没有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三种适合几乎所有的序列。）

6、纯化冻干：使用液相色谱纯化，收集目标峰液体，进行冻干，获得蓬松的粉末状固体多肽。不过这时要取小样复测下纯度 是否目标纯度。

7、最后总结：

杭州专肽生物技术有限公司（ALLPEPTIDE https://www.allpeptide.com）主营定制多肽合成业务，提供各类长肽，短肽，环肽，提供各类修饰肽，如：荧光标记修饰（CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等），功能基团修饰肽（叠氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等），同位素标记肽（N15、C13），订书肽（Stapled Peptide）,脂肪酸修饰肽（Pal、Myr、Ste），磷酸化修饰肽（P-Ser、P-Thr、P-Tyr），环肽（酰胺键环肽、一对或者多对二硫键环），生物素标记肽，PEG修饰肽，甲基化修饰肽

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