一个有效的和选择性 nociceptin receptor (NOP) 部分激动剂。
编号：152057
CAS号：200959-47-3/408305-09-9/2863657-54-7
单字母：Ac-RYYRWK-CONH2
| 编号: | 152057 |
| 中文名称: | NOP 受体激动剂、 痛敏肽受体激动剂、Nociceptin receptor Agoinst |
| 英文名: | Nociceptin receptor Agoinst |
| CAS号: | 200959-47-3，free base 408305-09-9，TFA盐 2863657-54-7，醋酸盐 |
| 单字母: | Ac-RYYRWK-CONH2 |
| 三字母: | Ac N端乙酰化封端 -Arg精氨酸 -Tyr酪氨酸 -Tyr酪氨酸 -Arg精氨酸 -Trp色氨酸 -Lys赖氨酸 -CONH2C端酰胺化 |
| 氨基酸个数: | 6 |
| 分子式: | C49H69O9N15 |
| 平均分子量: | 1012.17 |
| 精确分子量: | 1011.54 |
| 等电点(PI): | - |
| pH=7.0时的净电荷数: | 5 |
| 平均亲水性: | -0.2 |
| 疏水性值: | -2.6 |
| 消光系数: | 8480 |
| 来源: | 人工化学合成，仅限科学研究使用，不得用于人体。 |
| 储存条件: | 负80℃至负20℃ |
| 标签: | 其它激动剂多肽(Agonist Peptide) |
Ac-RYYRWK-NH2 是一个有效的和选择性 nociceptin receptor (NOP) 部分激动剂。[3H]Ac-RYYRWK-NH2 结合鼠皮层膜的 Kd 为0.071 nM，但是对 µ-,κ- 或 δ 阿片受体没有亲和力。
Ac-RYYRWK-NH2 is a potent and selective partial agonist for the nociceptin receptor (NOP), [3H]Ac-RYYRWK-NH2 binds to rat cortical membranes ORL1 with a Kd of 0.071 nM, but has no affinity for µ-, κ- or δ-opioid receptors.
Ac-RYYRWK-NH2醋酸盐是一种强效和选择性的伤害肽受体（NOP）部分激动剂，它是内源性ORL1受体激动剂。
Ac-RYYRWK-NH2 acetate is a potent and selective partial agonist of the nociceptin receptor (NOP), which is the endogenous ORL1 receptor agonist.
C T Dooley, et al. Binding and in vitro activities of peptides with high affinity for the nociceptin/orphanin FQ receptor, ORL1.J Pharmacol Exp Ther. 1997 Nov;283(2):735-41. : https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/9353393/
M Ho, et al, Characterization of the ORL(1) receptor on adrenergic nerves in the rat anococcygeus muscle. Br J Pharmacol. 2000 Sep;131(2):349-55. : https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/10991930/
多肽Ac-Arg-Tyr-Tyr-Arg-Trp-Lys-NH2的合成步骤：
1、合成MBHA树脂：取若干克MBHA树脂（如初始取代度为0.5mmol/g）和1倍树脂摩尔量的Fmoc-Linker-OH加入到反应器中，加入DMF，搅拌使氨基酸完全溶解。再加入树脂2倍量的DIEPA，搅拌混合均匀。再加入树脂0.95倍量的HBTU，搅拌混合均匀。反应3-4小时后，用DMF洗涤3次。用2倍树脂体积的10%乙酸酐/DMF 进行封端30分钟。然后再用DMF洗涤3次，甲醇洗涤2次，DCM洗涤2次，再用甲醇洗涤2次。真空干燥12小时以上，得到干燥的树脂{Fmoc-Linker-MHBA Resin}，测定取代度。这里测得取代度为 0.3mmol/g。结构如下图：
2、脱Fmoc：取2.97g的上述树脂，用DCM或DMF溶胀20分钟。用DMF洗涤2遍。加3倍树脂体积的20%Pip/DMF溶液，鼓氮气30分钟，然后2倍树脂体积的DMF 洗涤5次。得到 H2N-Linker-MBHA Resin 。（此步骤脱除Fmoc基团，茚三酮检测为蓝色，Pip为哌啶）。结构图如下：
3、缩合：取2.67mmol Fmoc-Lys(Boc)-OH 氨基酸，加入到上述树脂里，加适当DMF溶解氨基酸，再依次加入5.35mmol DIPEA，2.54mmol HBTU。反应30分钟后，取小样洗涤，茚三酮检测为无色。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂。（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。得到Fmoc-Lys(Boc)-Linker-MBHA Resin。氨基酸：DIPEA：HBTU：树脂=3：6：2.85：1（摩尔比）。结构图如下：
4、依次循环步骤二、步骤三，依次得到
H2N-Lys(Boc)-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Linker-MBHA Resin
H2N-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Linker-MBHA Resin
H2N-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Tyr(tBu)-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Linker-MBHA Resin
H2N-Tyr(tBu)-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Tyr(tBu)-Tyr(tBu)-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Linker-MBHA Resin
H2N-Tyr(tBu)-Tyr(tBu)-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Tyr(tBu)-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Linker-MBHA Resin
以上中间结构，均可在专肽生物多肽计算器-多肽结构计算器中，一键画出。
最后再经过步骤二得到 H2N-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Tyr(tBu)-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Linker-MBHA Resin，结构如下：
5、乙酸酐反应连接：在上述树脂中，加入适当DMF后，再加入2.67mmol乙酸酐到树脂中，再加入5.35mmol DIPEA，鼓氮气反应30分钟。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。 得到Ac-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Tyr(tBu)-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Linker-MBHAResin。 结构如下：
6、切割：6倍树脂体积的切割液（或每1g树脂加8ml左右的切割液），摇床摇晃 2小时，过滤掉树脂，用冰无水乙醚沉淀滤液，并用冰无水乙醚洗涤沉淀物3次，最后将沉淀物放真空干燥釜中，常温干燥24小试，得到粗品Ac-Arg-Tyr-Tyr-Arg-Trp-Lys-NH2。结构图见产品结构图。
切割液选择：1）TFA：H2O=95%：5%
2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%
3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5%：5%：2.5%：2.5%：2.5%
（前两种适合没有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三种适合几乎所有的序列。）
7、纯化冻干：使用液相色谱纯化，收集目标峰液体，进行冻干，获得蓬松的粉末状固体多肽。不过这时要取小样复测下纯度 是否目标纯度。
8、最后总结：
杭州专肽生物技术有限公司（ALLPEPTIDE https://www.allpeptide.com）主营定制多肽合成业务，提供各类长肽，短肽，环肽，提供各类修饰肽，如：荧光标记修饰（CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等），功能基团修饰肽（叠氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等），同位素标记肽（N15、C13），订书肽（Stapled Peptide）,脂肪酸修饰肽（Pal、Myr、Ste），磷酸化修饰肽（P-Ser、P-Thr、P-Tyr），环肽（酰胺键环肽、一对或者多对二硫键环），生物素标记肽，PEG修饰肽，甲基化修饰肽
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