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专注多肽 服务科研
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一种来自酪氨酸酶 (tyrosinase) 的 HLA-A2.1 限制性表位多肽，已被应用于开发具有混合疗效的肿瘤靶向疫苗。
编号：190861
CAS号：168650-46-2
单字母：H2N-YMDGTMSQV-OH
Tyrosinase 369-377, human 是一种来自酪氨酸酶 (tyrosinase) 的 HLA-A2.1 限制性表位多肽，已被应用于开发具有混合疗效的肿瘤靶向疫苗。
Tyrosinase 369-377, human is a HLA-A2.1-restricted epitope derived from tyrosinase, has been used to develop tumor-targeted vaccines with mixed efficacy[1][2].
Tyrosinase protein:\nPeptide Tyrosinase (Asp371) – HLA-A*0201 (YMDGTMSQV) is a human tyrosinase-derived (369-377) peptide by posttranslational conversion of the sequence YMNGTMSQV. Tyrosinase is an oxidase membrane-bound protein. Tyrosinase play a key role in the melanin synthesis pathway. Tyrosinase is presented on the surface of HLA-A*02:01 melanomas and also expressed in melanocytes. Tyrosinase has been still suggested to be a tumor antigen and might be implicated in improvement of immunotherapeutic strategies such as for efficient anticancer vaccine development.\nApplications of Peptide Tyrosinase (Asp371) – HLA-A*0201 (YMDGTMSQV):\nPeptide Tyrosinase (Asp371) – HLA-A*0201 (YMDGTMSQV) is used to stimulate specific cytotoxic T lymphocytes (CTL) in PBMCs and then to analyze CTL response especially the cytokine production by ELISPOT assay. Peptide Tyrosinase (Asp371) – HLA-A*0201 (YMDGTMSQV) is also involved in experimental therapies of metastatic melanoma by allogeneic hematopoietic stem cell transplantation. In fact, cytotoxic T cells were generated from peripherical blood mononuclear cells (PBMCs) of HLA-A*02:01 healthy donors after being stimulated by injection of Asp371 antigen (2). This strategy raises issues which concern the graft versus tumor (GvT) effect and graft versus host disease (GvHD).
Asp370- 酪氨酸酶（368-376）是酪氨酸酶肽片段，在 370 位含天冬氨酸取代，调节酶活性。酪氨酸酶催化黑色素生成，在色素沉着障碍中起关键作用。研究人员用该类似物研究酶动力学及其作为色素沉着相关疾病治疗靶点的潜力。
Asp370-Tyrosinase (368-376) is a tyrosinase peptide fragment with an aspartic acid substitution at position 370, which modulates enzyme activity. Tyrosinase catalyzes melanin production and plays a key role in pigmentation disorders. Researchers use this analog to study enzyme kinetics and its potential as a target for treating pigmentation-related conditions.
人 天冬氨酸 371 酪氨酸酶（369‑377）是源自黑色素生成酶催化区域的短调控多肽基序。其酸性取代影响与氧化生物化学相关的局部电荷分布和折叠倾向。研究人员用该片段研究铜酶相互作用和多肽‑蛋白质识别。该片段也支持黑素细胞信号通路研究。
Asp371 Tyrosinase(369-377), human is a short regulatory peptide motif derived from the catalytic region of the melanogenic enzyme. Its acidic substitution influences local charge distribution and folding tendencies relevant to oxidative biochemistry. Researchers use this segment to investigate copper-enzyme interactions and peptide-protein recognition. The fragment also supports studies on melanocyte signaling pathways.
| DOI | 名称 | |
|---|---|---|
| 10.1200/JCO.2002.20.4.1075 | Phase I trial of adoptive immunotherapy with cytolytic T lymphocytes immunized against a tyrosinase epitope | 下载 |
| 10.4049/jimmunol.1103213 | Analysis of the processing of seven human tumor antigens by intermediate proteasomes | 下载 |
多肽H2N-Tyr-Met-Asp-Gly-Thr-Met-Ser-Gln-Val-COOH的合成步骤：
1、合成CTC树脂：称取1.53g CTC Resin（如初始取代度约为1.15mmol/g）和2.11mmol Fmoc-Val-OH于反应器中，加入适量DCM溶解氨基酸（需要注意，此时CTC树脂体积会增大好几倍，避免DCM溶液过少），再加入5.28mmol DIPEA（Mw：129.1,d：0.740g/ml），反应2-3小时后，可不抽滤溶液，直接加入1ml的HPLC级甲醇，封端半小时。依次用DMF洗涤2次，甲醇洗涤1次，DCM洗涤一次，甲醇洗涤一次，DCM洗涤一次，DMF洗涤2次（这里使用甲醇和DCM交替洗涤，是为了更好地去除其他溶质，有利于后续反应）。得到 Fmoc-Val-CTC Resin。结构图如下：
2、脱Fmoc：加3倍树脂体积的20%Pip/DMF溶液，鼓氮气30分钟，然后2倍树脂体积的DMF 洗涤5次。得到 H2N-Val-CTC Resin 。（此步骤脱除Fmoc基团，茚三酮检测为蓝色，Pip为哌啶）。结构图如下：
3、缩合：取5.28mmol Fmoc-Gln(Trt)-OH 氨基酸，加入到上述树脂里，加适当DMF溶解氨基酸，再依次加入10.56mmol DIPEA，5.01mmol HBTU。反应30分钟后，取小样洗涤，茚三酮检测为无色。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂。（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。得到Fmoc-Gln(Trt)-Val-CTC Resin。氨基酸：DIPEA：HBTU：树脂=3：6：2.85：1（摩尔比）。结构图如下：
4、依次循环步骤二、步骤三，依次得到
H2N-Gln(Trt)-Val-CTC Resin
Fmoc-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Val-CTC Resin
H2N-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Val-CTC Resin
Fmoc-Met-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Val-CTC Resin
H2N-Met-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Val-CTC Resin
Fmoc-Thr(tBu)-Met-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Val-CTC Resin
H2N-Thr(tBu)-Met-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Val-CTC Resin
Fmoc-Gly-Thr(tBu)-Met-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Val-CTC Resin
H2N-Gly-Thr(tBu)-Met-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Val-CTC Resin
Fmoc-Asp(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-Met-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Val-CTC Resin
H2N-Asp(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-Met-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Val-CTC Resin
Fmoc-Met-Asp(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-Met-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Val-CTC Resin
H2N-Met-Asp(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-Met-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Val-CTC Resin
Fmoc-Tyr(tBu)-Met-Asp(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-Met-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Val-CTC Resin
以上中间结构，均可在专肽生物多肽计算器-多肽结构计算器中，一键画出。
最后再经过步骤二得到 H2N-Tyr(tBu)-Met-Asp(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-Met-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Val-CTC Resin，结构如下：
5、切割：6倍树脂体积的切割液（或每1g树脂加8ml左右的切割液），摇床摇晃 2小时，过滤掉树脂，用冰无水乙醚沉淀滤液，并用冰无水乙醚洗涤沉淀物3次，最后将沉淀物放真空干燥釜中，常温干燥24小试，得到粗品H2N-Tyr-Met-Asp-Gly-Thr-Met-Ser-Gln-Val-COOH。结构图见产品结构图。
切割液选择：1）TFA：H2O=95%：5%、TFA：H2O=97.5%：2.5%
2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%
3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5%：5%：2.5%：2.5%：2.5%
（前两种适合没有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三种适合几乎所有的序列。）
6、纯化冻干：使用液相色谱纯化，收集目标峰液体，进行冻干，获得蓬松的粉末状固体多肽。不过这时要取小样复测下纯度 是否目标纯度。
7、最后总结：
杭州专肽生物技术有限公司（ALLPEPTIDE https://www.allpeptide.com）主营定制多肽合成业务，提供各类长肽，短肽，环肽，提供各类修饰肽，如：荧光标记修饰（CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等），功能基团修饰肽（叠氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等），同位素标记肽（N15、C13），订书肽（Stapled Peptide）,脂肪酸修饰肽（Pal、Myr、Ste），磷酸化修饰肽（P-Ser、P-Thr、P-Tyr），环肽（酰胺键环肽、一对或者多对二硫键环），生物素标记肽，PEG修饰肽，甲基化修饰肽
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