FRET 底物 Mca-RPKPYA-Nva-WMK(Dnp)-酰胺被溶基质素 1 (MMP-3) (kcat/Km = 59400 M⁻¹s⁻¹) 水解的速度是间质胶原酶 (MMP-1) 的 60 倍,.,然而，它在 MMP-3、明胶酶 A (MMP-2) (kcat/Km= 54000 M⁻¹s⁻¹) 和明胶酶 B (MMP-9) (kcat/Km= 55300 M⁻¹s⁻¹) 之间几乎没有区别,）。金属弹性蛋白酶 (MMP-12) 以 243000 M⁻¹s⁻¹ 的 kcat/Km 消化这种荧光底物
编号：142386
CAS号：158584-08-8
单字母：Mca-RPKPYA-Nva-WM-K(Dnp)-CONH2
| 编号: | 142386 |
| 中文名称: | 基质金属蛋白酶MMP substrate、NFF-3NFF-2 |
| 英文名: | NFF-2 |
| CAS号: | 158584-08-8 |
| 单字母: | Mca-RPKPYA-Nva-WM-K(Dnp)-CONH2 |
| 三字母: | MCA Mca、7-甲氧基香豆素-4-乙酸修饰 -Arg精氨酸 -Pro脯氨酸 -Lys赖氨酸 -Pro脯氨酸 -Tyr酪氨酸 -Ala丙氨酸 -Nva正缬氨酸 -Trp色氨酸 -Met甲硫氨酸 -Lys(Dnp)侧链Dnp保护的赖氨酸 -CONH2C端酰胺化 |
| 氨基酸个数: | 10 |
| 分子式: | C79H105O19N19S1 |
| 平均分子量: | 1656.86 |
| 精确分子量: | 1655.76 |
| 等电点(PI): | - |
| pH=7.0时的净电荷数: | 3 |
| 平均亲水性: | -0.43333333333333 |
| 疏水性值: | -1.21 |
| 外观与性状: | 白色粉末状固体 |
| 消光系数: | 6990 |
| 来源: | 人工化学合成，仅限科学研究使用，不得用于人体。 |
| 纯度: | 95%、98% |
| 盐体系: | 可选TFA、HAc、HCl或其它 |
| 储存条件: | 负80℃至负20℃ |
| 标签: | 氨基酸衍生物肽 侧链保护基肽 |
The FRET substrate Mca-RPKPYA-Nva-WMK(Dnp)-amide was hydrolyzed 60 times more rapidly by stromelysin 1 (MMP-3) (kcat/Km= 59400 M⁻¹s⁻¹) than by interstitial collagenase (MMP-1). However, it showed little discrimination between MMP-3, gelatinase A (MMP-2) (kcat/Km= 54000 M⁻¹s⁻¹), and gelatinase B (MMP-9) (kcat/Km= 55300 M⁻¹s⁻¹). Metalloelastase (MMP-12) digested this fluorogenic substrate with a kcat/Km of 243000 M⁻¹s⁻¹.
| DOI | 名称 | |
|---|---|---|
| 10.1002/art.20900 | Effect of inhibition of matrix metalloproteinases on cartilage loss in vitro and in a guinea pig model of osteoarthritis | 下载 |
| 10.1111/j.1474-9726.2012.00797.x | Wild-type amyloid beta 1-40 peptide induces vascular smooth muscle cell death independently from matrix metalloprotease activity | 下载 |
| 10.1007/s10195-012-0200-4 | Pravastatin suppresses matrix metalloproteinase expression and activity in human articular chondrocytes stimulated by interleukin-1β | 下载 |
| 10.1021/pr400276r | The presence of outer arm fucose residues on the N-glycans of tissue inhibitor of metalloproteinases-1 reduces its activity | 下载 |
| 10.1074/jbc.M002349200 | Identification and characterization of human endometase (Matrix metalloproteinase-26) from endometrial tumor | 下载 |
| 10.1042/0264-6021:3560705 | Characterization of matrix metalloproteinase-26, a novel metalloproteinase widely expressed in cancer cells of epithelial origin | 下载 |
多肽MCA-Arg-Pro-Lys-Pro-Tyr-Ala-Nva-Trp-Met-Lys(Dnp)-NH2的合成步骤：
1、合成MBHA树脂：取若干克MBHA树脂（如初始取代度为0.5mmol/g）和1倍树脂摩尔量的Fmoc-Linker-OH加入到反应器中，加入DMF，搅拌使氨基酸完全溶解。再加入树脂2倍量的DIEPA，搅拌混合均匀。再加入树脂0.95倍量的HBTU，搅拌混合均匀。反应3-4小时后，用DMF洗涤3次。用2倍树脂体积的10%乙酸酐/DMF 进行封端30分钟。然后再用DMF洗涤3次，甲醇洗涤2次，DCM洗涤2次，再用甲醇洗涤2次。真空干燥12小时以上，得到干燥的树脂{Fmoc-Linker-MHBA Resin}，测定取代度。这里测得取代度为 0.3mmol/g。结构如下图：
2、脱Fmoc：取1.86g的上述树脂，用DCM或DMF溶胀20分钟。用DMF洗涤2遍。加3倍树脂体积的20%Pip/DMF溶液，鼓氮气30分钟，然后2倍树脂体积的DMF 洗涤5次。得到 H2N-Linker-MBHA Resin 。（此步骤脱除Fmoc基团，茚三酮检测为蓝色，Pip为哌啶）。结构图如下：
3、缩合：取1.67mmol Fmoc-Lys(Dnp)-OH 氨基酸，加入到上述树脂里，加适当DMF溶解氨基酸，再依次加入3.35mmol DIPEA，1.59mmol HBTU。反应30分钟后，取小样洗涤，茚三酮检测为无色。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂。（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。得到Fmoc-Lys(Dnp)-Linker-MBHA Resin。氨基酸：DIPEA：HBTU：树脂=3：6：2.85：1（摩尔比）。结构图如下：
4、依次循环步骤二、步骤三，依次得到
H2N-Lys(Dnp)-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Met-Lys(Dnp)-Linker-MBHA Resin
H2N-Met-Lys(Dnp)-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Trp(Boc)-Met-Lys(Dnp)-Linker-MBHA Resin
H2N-Trp(Boc)-Met-Lys(Dnp)-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Nva-Trp(Boc)-Met-Lys(Dnp)-Linker-MBHA Resin
H2N-Nva-Trp(Boc)-Met-Lys(Dnp)-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Ala-Nva-Trp(Boc)-Met-Lys(Dnp)-Linker-MBHA Resin
H2N-Ala-Nva-Trp(Boc)-Met-Lys(Dnp)-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Tyr(tBu)-Ala-Nva-Trp(Boc)-Met-Lys(Dnp)-Linker-MBHA Resin
H2N-Tyr(tBu)-Ala-Nva-Trp(Boc)-Met-Lys(Dnp)-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Pro-Tyr(tBu)-Ala-Nva-Trp(Boc)-Met-Lys(Dnp)-Linker-MBHA Resin
H2N-Pro-Tyr(tBu)-Ala-Nva-Trp(Boc)-Met-Lys(Dnp)-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Lys(Boc)-Pro-Tyr(tBu)-Ala-Nva-Trp(Boc)-Met-Lys(Dnp)-Linker-MBHA Resin
H2N-Lys(Boc)-Pro-Tyr(tBu)-Ala-Nva-Trp(Boc)-Met-Lys(Dnp)-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Pro-Lys(Boc)-Pro-Tyr(tBu)-Ala-Nva-Trp(Boc)-Met-Lys(Dnp)-Linker-MBHA Resin
H2N-Pro-Lys(Boc)-Pro-Tyr(tBu)-Ala-Nva-Trp(Boc)-Met-Lys(Dnp)-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Arg(Pbf)-Pro-Lys(Boc)-Pro-Tyr(tBu)-Ala-Nva-Trp(Boc)-Met-Lys(Dnp)-Linker-MBHA Resin
以上中间结构，均可在专肽生物多肽计算器-多肽结构计算器中，一键画出。
最后再经过步骤二得到 H2N-Arg(Pbf)-Pro-Lys(Boc)-Pro-Tyr(tBu)-Ala-Nva-Trp(Boc)-Met-Lys(Dnp)-Linker-MBHA Resin，结构如下：
5、7-甲氧基香豆素-4-乙酸(MCA)反应连接：在上述树脂中，加入适当DMF后，再加入1.67mmol 7-甲氧基香豆素-4-乙酸(MCA)到树脂中，再加入3.35mmol DIPEA、1.59mmol HBTU，鼓氮气反应30分钟。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。 得到MCA-Arg(Pbf)-Pro-Lys(Boc)-Pro-Tyr(tBu)-Ala-Nva-Trp(Boc)-Met-Lys(Dnp)-Linker-MBHAResin。 结构如下：
5、切割：6倍树脂体积的切割液（或每1g树脂加8ml左右的切割液），摇床摇晃 2小时，过滤掉树脂，用冰无水乙醚沉淀滤液，并用冰无水乙醚洗涤沉淀物3次，最后将沉淀物放真空干燥釜中，常温干燥24小试，得到粗品MCA-Arg-Pro-Lys-Pro-Tyr-Ala-Nva-Trp-Met-Lys(Dnp)-NH2。结构图见产品结构图。
切割液选择：1）TFA：H2O=95%：5%
2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%
3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5%：5%：2.5%：2.5%：2.5%
（前两种适合没有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三种适合几乎所有的序列。）
6、纯化冻干：使用液相色谱纯化，收集目标峰液体，进行冻干，获得蓬松的粉末状固体多肽。不过这时要取小样复测下纯度 是否目标纯度。
7、最后总结：
杭州专肽生物技术有限公司（ALLPEPTIDE https://www.allpeptide.com）主营定制多肽合成业务，提供各类长肽，短肽，环肽，提供各类修饰肽，如：荧光标记修饰（CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等），功能基团修饰肽（叠氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等），同位素标记肽（N15、C13），订书肽（Stapled Peptide）,脂肪酸修饰肽（Pal、Myr、Ste），磷酸化修饰肽（P-Ser、P-Thr、P-Tyr），环肽（酰胺键环肽、一对或者多对二硫键环），生物素标记肽，PEG修饰肽，甲基化修饰肽
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