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MBP MAPK Substrate 可以用作 MAPK 的外源底物。
MBP MAPK Substrate is used as an exogenous substrate for MAPK[1].

序列 APRTPGGRR 包含源自牛髓鞘碱性蛋白 95-98 位氨基酸（PRTP）的天然序列。其余序列并非源自天然序列，而是合成构建体。该底物对 MAP 激酶具有特异性：p44MAPK 细胞外信号调节激酶 1（ERK1） 和 p42MAPK（ERK2）。它含有 MAP 激酶识别的共有序列 Pro-X-（Ser/Thr）-Pro。该肽是 ERK 磷酸化反应最有效的底物。该底物在苏氨酸 97 位被激酶磷酸化，也可被 MAPK p38 磷酸化。

The sequence APRTPGGRR contains a native sequence derived from bovine myelin basic protein amino acids 95-98 (PRTP). The rest of the sequence is not derived from a native sequence, but is a synthetic construct. This substrate is specific for MAP kinases: p44MAPK extracellular signal-regulated kinase 1 (ERK1) and p42MAPK (ERK2). It contains the consensus sequence Pro-X-(Ser/Thr)-Pro that is recognized by MAP kinase. This peptide is the most efficient substrate for phosphorylation reaction by ERK. The substrate is phosphorylated by kinases on threonine 97 and can also be phosphorylated by MAPK p38.

丙氨酸 - 脯氨酸 - 精氨酸 - 苏氨酸 - 脯氨酸 - 甘氨酸 - 甘氨酸 - 精氨酸 - 精氨酸 - OH 含有碱性残基与柔性甘氨酸片段，影响骨架流动性。其结构支持分析蛋白酶敏感基序与转角形成。研究人员用其检测由电荷分布调控的相互作用。该多肽有助于短生物活性序列研究。

H-Ala-Pro-Arg-Thr-Pro-Gly-Gly-Arg-Arg-OH incorporates basic residues and flexible glycine segments that influence backbone mobility. Its structure supports analysis of protease-sensitive motifs and turn formation. Researchers use it to examine interactions governed by charge distribution. The peptide contributes to studies of short bioactive sequences.

K C Gause, et al. Effects of phorbol ester on mitogen-activated protein kinase kinase activity in wild-type and phorbol ester-resistant EL4 thymoma cells. J Biol Chem. 1993 Aug 5;268(22):16124-9. : https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/8344897/

多肽H2N-Ala-Pro-Arg-Thr-Pro-Gly-Gly-Arg-Arg-COOH的合成步骤：

1、合成CTC树脂：称取1.55g CTC Resin（如初始取代度约为0.63mmol/g）和1.17mmol Fmoc-Arg(Pbf)-OH于反应器中，加入适量DCM溶解氨基酸（需要注意，此时CTC树脂体积会增大好几倍，避免DCM溶液过少），再加入2.93mmol DIPEA（Mw：129.1,d：0.740g/ml），反应2-3小时后，可不抽滤溶液，直接加入1ml的HPLC级甲醇，封端半小时。依次用DMF洗涤2次，甲醇洗涤1次，DCM洗涤一次，甲醇洗涤一次，DCM洗涤一次，DMF洗涤2次（这里使用甲醇和DCM交替洗涤，是为了更好地去除其他溶质，有利于后续反应）。得到  Fmoc-Arg(Pbf)-CTC Resin。结构图如下：

2、脱Fmoc：加3倍树脂体积的20%Pip/DMF溶液，鼓氮气30分钟，然后2倍树脂体积的DMF 洗涤5次。得到 H2N-Arg(Pbf)-CTC Resin 。（此步骤脱除Fmoc基团，茚三酮检测为蓝色，Pip为哌啶）。结构图如下：

3、缩合：取2.93mmol Fmoc-Arg(Pbf)-OH 氨基酸，加入到上述树脂里，加适当DMF溶解氨基酸，再依次加入5.86mmol DIPEA，2.78mmol HBTU。反应30分钟后，取小样洗涤，茚三酮检测为无色。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂。（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。得到Fmoc-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-CTC Resin。氨基酸：DIPEA：HBTU：树脂=3：6：2.85：1（摩尔比）。结构图如下：

4、依次循环步骤二、步骤三，依次得到

H2N-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-CTC Resin

Fmoc-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-CTC Resin

H2N-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-CTC Resin

Fmoc-Gly-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-CTC Resin

H2N-Gly-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-CTC Resin

Fmoc-Pro-Gly-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-CTC Resin

H2N-Pro-Gly-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-CTC Resin

Fmoc-Thr(tBu)-Pro-Gly-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-CTC Resin

H2N-Thr(tBu)-Pro-Gly-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-CTC Resin

Fmoc-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Pro-Gly-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-CTC Resin

H2N-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Pro-Gly-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-CTC Resin

Fmoc-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Pro-Gly-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-CTC Resin

H2N-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Pro-Gly-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-CTC Resin

Fmoc-Ala-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Pro-Gly-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-CTC Resin

以上中间结构，均可在专肽生物多肽计算器-多肽结构计算器中，一键画出。

最后再经过步骤二得到 H2N-Ala-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Pro-Gly-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-CTC Resin，结构如下：

5、切割：6倍树脂体积的切割液（或每1g树脂加8ml左右的切割液），摇床摇晃 2小时，过滤掉树脂，用冰无水乙醚沉淀滤液，并用冰无水乙醚洗涤沉淀物3次，最后将沉淀物放真空干燥釜中，常温干燥24小试，得到粗品H2N-Ala-Pro-Arg-Thr-Pro-Gly-Gly-Arg-Arg-COOH。结构图见产品结构图。

切割液选择：1）TFA：H2O=95%：5%、TFA：H2O=97.5%：2.5%

2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%

3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5%：5%：2.5%：2.5%：2.5%

（前两种适合没有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三种适合几乎所有的序列。）

6、纯化冻干：使用液相色谱纯化，收集目标峰液体，进行冻干，获得蓬松的粉末状固体多肽。不过这时要取小样复测下纯度 是否目标纯度。

7、最后总结：

杭州专肽生物技术有限公司（ALLPEPTIDE https://www.allpeptide.com）主营定制多肽合成业务，提供各类长肽，短肽，环肽，提供各类修饰肽，如：荧光标记修饰（CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等），功能基团修饰肽（叠氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等），同位素标记肽（N15、C13），订书肽（Stapled Peptide）,脂肪酸修饰肽（Pal、Myr、Ste），磷酸化修饰肽（P-Ser、P-Thr、P-Tyr），环肽（酰胺键环肽、一对或者多对二硫键环），生物素标记肽，PEG修饰肽，甲基化修饰肽

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