The big endothelins comprise residues 53-90 (human big ET-1) and 53-91 (porcine big ET-1) of the endothelin precursor (preproendothelin). Compared to the mature endothelin-1 (ET-1), both peptides show less vasoconstrictor activity in vitro, but similar pr
编号：176540
CAS号：120796-99-8
单字母：H2N-CSCSSLMDKECVYFCHLDIIWVNTPEHIVPYGLGSPSRS-OH(Disulfide Bridge:C1-C15 & C3-C11)
| 编号: | 176540 |
| 中文名称: | Big Endothelin-1(1-39), porcine |
| 英文名: | Big Endothelin-1(1-39), porcine |
| 英文同义词: | Big Endothelin 1 (1 - 39), porcine |
| CAS号: | 120796-99-8 |
| 单字母: | H2N-CSCSSLMDKECVYFCHLDIIWVNTPEHIVPYGLGSPSRS-OH(Disulfide Bridge:C1-C15 & C3-C11) |
| 三字母: | H2N-Cys-Ser-Cys-Ser-Ser-Leu-Met-Asp-Lys-Glu-Cys-Val-Tyr-Phe-Cys-His-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-Val-Asn-Thr-Pro-Glu-His-Ile-Val-Pro-Tyr-Gly-Leu-Gly-Ser-Pro-Ser-Arg-Ser-OH(Disulfide Bridge:Cys1-Cys15 & Cys3-Cys11) |
| 氨基酸个数: | 39 |
| 分子式: | C193H289N49O58S5 |
| 平均分子量: | 4383.98 |
| 精确分子量: | 4380.98 |
| 等电点(PI): | 9.52 |
| pH=7.0时的净电荷数: | 5.32 |
| 平均亲水性: | -0.43235294117647 |
| 疏水性值: | 0.16 |
| 外观与性状: | 白色粉末状固体 |
| 消光系数: | 8480 |
| 来源: | 人工化学合成，仅限科学研究使用，不得用于人体。 |
| 纯度: | 95%、98% |
| 盐体系: | 可选TFA、HAc、HCl或其它 |
| 生成周期: | 2-3周 |
| 储存条件: | 负80℃至负20℃ |
| 标签: | 二硫键环肽 |
Big Endothelin-1 (1-39), porcine 是内皮素-1 (endothelin-1) 的前体。Endothelin-1 (ET-1) 是一种有效的升压肽。Big Endothelin-1 (1-39), porcine 在体内具有类似的升压作用。
Big Endothelin-1 (1-39), porcine is the precursor of endothelin-1. Endothelin-1 (ET-1) is a potent vasopressor peptide. Big Endothelin-1 (1-39), porcine has similar pressor effects in vivo[1].
二硫键广泛存在与蛋白结构中，对稳定蛋白结构具有非常重要的意义，二硫键一般是通过序列中的2个Cys的巯基，经氧化形成。
形成二硫键的方法很多：空气氧化法，DMSO氧化法，过氧化氢氧化法等。
二硫键的合成过程， 可以通过Ellman检测以及HPLC检测方法对其反应进程进行监测。
如果多肽中只含有1对Cys，那二硫键的形成是简单的。多肽经固相或液相合成，然后在pH8-9的溶液中进行氧化。
当需要形成2对或2对以上的二硫键时，合成过程则相对复杂。尽管二硫键的形成通常是在合成方案的最后阶段完成，但有时引入预先形成的二硫化物是有利于连合或延长肽链的。通常采用的巯基保护基有trt, Acm, Mmt, tBu, Bzl, Mob, Tmob等多种基团。我们分别列出两种以2-Cl树脂和Rink树脂为载体合成的多肽上多对二硫键形成路线：
二硫键反应条件选择
二硫键即为蛋白质或多肽分子中两个不同位点Cys的巯基（-SH）被氧化形成的S-S共价键。 一条肽链上不同位置的氨基酸之间形成的二硫键，可以将肽链折叠成特定的空间结构。多肽分 子通常分子量较大，空间结构复杂，结构中形成二硫键时要求两个半胱氨酸在空间距离上接近。 此外，多肽结构中还原态的巯基化学性质活泼，容易发生其他的副反应，而且肽链上其他侧链 也可能会发生一系列修饰，因此，肽链进行修饰所选取的氧化剂和氧化条件是反应的关键因素， 反应机理也比较复杂，既可能是自由基反应，也可能是离子反应。
反应条件有多种选择，比如空气氧化，DMSO氧化等温和的氧化过程，也可以采用H2O2，I2， 汞盐等激烈的反应条件。
空气氧化法： 空气氧化法形成二硫键是多肽合成中最经典的方法，通常是将巯基处于还原态的多肽溶于水中，在近中性或弱碱性条件下（PH值6.5-10），反应24小时以上。为了降低分子之间二硫键形成的可能，该方法通常需要在低浓度条件下进行。
碘氧化法：将多肽溶于25%的甲醇水溶液或30%的醋酸水溶液中，逐滴滴加10-15mol/L的碘进行氧化，反应15-40min。当肽链中含有对碘比较敏感的Tyr、Trp、Met和His的残基时，氧化条件要控制的更精确，氧化完后，立即加入维生素C或硫代硫酸钠除去过量的碘。 当序列中有两对或多对二硫键需要成环时，通常有两种情况：
自然随机成环: 序列中的Cys之间随机成环，与一对二硫键成环条件相似；
定点成环： 定点成环即序列中的Cys按照设计要求形成二硫键，反应过程相对复杂。在 固相合成多肽之前，需要提前设计几对二硫键形成的顺序和方法路线，选择不同的侧链 巯基保护基，利用其性质差异，分步氧化形成两对或多对二硫键。 通常采用的巯基保护 基有trt, Acm, Mmt, tBu, Bzl, Mob, Tmob等多种基团。
A Hoffman, et al. Opposite effects of endothelin-1 and Big-endothelin-(1-39) on renal function in rats. Eur J Pharmacol. 1990 Jul 17;182(3):603-6. : https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/2226627/
多肽H2N-Cys-Ser-Cys-Ser-Ser-Leu-Met-Asp-Lys-Glu-Cys-Val-Tyr-Phe-Cys-His-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-Val-Asn-Thr-Pro-Glu-His-Ile-Val-Pro-Tyr-Gly-Leu-Gly-Ser-Pro-Ser-Arg-Ser-COOH的合成步骤：
1、合成CTC树脂：称取1.66g CTC Resin（如初始取代度约为0.41mmol/g）和0.82mmol Fmoc-Ser(tBu)-OH于反应器中，加入适量DCM溶解氨基酸（需要注意，此时CTC树脂体积会增大好几倍，避免DCM溶液过少），再加入2.04mmol DIPEA（Mw：129.1,d：0.740g/ml），反应2-3小时后，可不抽滤溶液，直接加入1ml的HPLC级甲醇，封端半小时。依次用DMF洗涤2次，甲醇洗涤1次，DCM洗涤一次，甲醇洗涤一次，DCM洗涤一次，DMF洗涤2次（这里使用甲醇和DCM交替洗涤，是为了更好地去除其他溶质，有利于后续反应）。得到 Fmoc-Ser(tBu)-CTC Resin。结构图如下：
2、脱Fmoc：加3倍树脂体积的20%Pip/DMF溶液，鼓氮气30分钟，然后2倍树脂体积的DMF 洗涤5次。得到 H2N-Ser(tBu)-CTC Resin 。（此步骤脱除Fmoc基团，茚三酮检测为蓝色，Pip为哌啶）。结构图如下：
3、缩合：取2.04mmol Fmoc-Arg(Pbf)-OH 氨基酸，加入到上述树脂里，加适当DMF溶解氨基酸，再依次加入4.08mmol DIPEA，1.94mmol HBTU。反应30分钟后，取小样洗涤，茚三酮检测为无色。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂。（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。得到Fmoc-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin。氨基酸：DIPEA：HBTU：树脂=3：6：2.85：1（摩尔比）。结构图如下：
4、依次循环步骤二、步骤三，依次得到
H2N-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
H2N-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
H2N-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
H2N-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
H2N-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
H2N-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
H2N-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
H2N-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
H2N-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
H2N-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
H2N-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
Fmoc-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
H2N-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
H2N-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
H2N-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
H2N-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
H2N-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
H2N-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
H2N-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
H2N-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
H2N-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
H2N-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
H2N-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
Fmoc-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
H2N-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
H2N-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
H2N-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
H2N-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
H2N-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Cys(Trt)-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
H2N-Cys(Trt)-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Glu(OtBu)-Cys(Trt)-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
H2N-Glu(OtBu)-Cys(Trt)-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Cys(Trt)-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
H2N-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Cys(Trt)-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Cys(Trt)-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
H2N-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Cys(Trt)-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Met-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Cys(Trt)-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
H2N-Met-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Cys(Trt)-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Leu-Met-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Cys(Trt)-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
H2N-Leu-Met-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Cys(Trt)-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Ser(tBu)-Leu-Met-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Cys(Trt)-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
H2N-Ser(tBu)-Leu-Met-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Cys(Trt)-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Leu-Met-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Cys(Trt)-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
H2N-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Leu-Met-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Cys(Trt)-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Leu-Met-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Cys(Trt)-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
H2N-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Leu-Met-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Cys(Trt)-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Ser(tBu)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Leu-Met-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Cys(Trt)-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
H2N-Ser(tBu)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Leu-Met-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Cys(Trt)-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Leu-Met-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Cys(Trt)-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin
以上中间结构，均可在专肽生物多肽计算器-多肽结构计算器中，一键画出。
最后再经过步骤二得到 H2N-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Leu-Met-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Cys(Trt)-Val-Tyr(tBu)-Phe-Cys(Trt)-His(Trt)-Leu-Asp(OtBu)-Ile-Ile-Trp(Boc)-Val-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Ile-Val-Pro-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Gly-Ser(tBu)-Pro-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-CTC Resin，结构如下：
5、切割：6倍树脂体积的切割液（或每1g树脂加8ml左右的切割液），摇床摇晃 2小时，过滤掉树脂，用冰无水乙醚沉淀滤液，并用冰无水乙醚洗涤沉淀物3次，最后将沉淀物放真空干燥釜中，常温干燥24小试，得到粗品H2N-Cys-Ser-Cys-Ser-Ser-Leu-Met-Asp-Lys-Glu-Cys-Val-Tyr-Phe-Cys-His-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-Val-Asn-Thr-Pro-Glu-His-Ile-Val-Pro-Tyr-Gly-Leu-Gly-Ser-Pro-Ser-Arg-Ser-COOH。结构图见产品结构图。
切割液选择：1）TFA：H2O=95%：5%
2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%
3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5%：5%：2.5%：2.5%：2.5%
（前两种适合没有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三种适合几乎所有的序列。）
6、纯化冻干：使用液相色谱纯化，收集目标峰液体，进行冻干，获得蓬松的粉末状固体多肽。不过这时要取小样复测下纯度 是否目标纯度。
7、最后总结：
杭州专肽生物技术有限公司（ALLPEPTIDE https://www.allpeptide.com）主营定制多肽合成业务，提供各类长肽，短肽，环肽，提供各类修饰肽，如：荧光标记修饰（CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等），功能基团修饰肽（叠氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等），同位素标记肽（N15、C13），订书肽（Stapled Peptide）,脂肪酸修饰肽（Pal、Myr、Ste），磷酸化修饰肽（P-Ser、P-Thr、P-Tyr），环肽（酰胺键环肽、一对或者多对二硫键环），生物素标记肽，PEG修饰肽，甲基化修饰肽等。
以上所有内容，为专肽生物原创内容，请勿发布到其他网站上。
