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RGD肽-说明

RGD肽是指含有由Arg-Gly-Asp三个氨基酸组成的序列多肽，有直线肽和环肽之分。它们是许多细胞外基质蛋白（如VN、FN、FGN、胶原等）等最小识别短肽序列。

研究发现，RGD序列肽具有广泛的生物活性，可用于心血管疾病、骨质疏松和炎症等疾病的治疗，还可以预防和治疗由细胞粘附异常而导致的肿瘤，尤其是发展性肿瘤的转移；另一方面，RGD 序列肽又可作为兴奋剂，促进损伤的器官与组织的再生、伤口的愈合等等，RGD作为某些整合素的受体，其选择性部分依赖于RGD的构象以及RGD周围的氨基酸残基。

为此，近几年，许多科技工作者合成了一系列RGD三肽、四肽、五肽等，还合成了RGD环肽、双线肽、RGD模拟肽等等。为了满足客户对各种RGD序列肽的需求，专肽生物提供最广泛的RGD序列肽库，以满足科研工作者对RGD肽的需求。

专肽生物提供各种RGD肽的现货，缩短科研工作者的项目时间，例如c(RGDfK)、c(RGDfC)、c(RADyK)、c(RGDyK)、c(RADfC)、环状多肽c(RGDfK)-巯基乙酸、c(RGDfK)-PEG2-巯基乙酸、Mpa-Ahx-c(RGDfK)、环状多肽c(RGDfK)-半胱氨酸、DOTA-c(RGDfK)、NOTA-c(RGDfK)、NOTA-c(RGDyK)、DOTA-c(RGDyK)、E[c(RGDfK)]2、E[c(RGDyK)]2、DDDDD-c(RGDfK)等等，具体可咨询销售人员。

多肽Ac-Gly-Arg-Asp-Gly-Ser-Pro-Gly-Gly-Phe-Lys-Phe-Glu-Phe-Lys-Phe-Glu-NH2的合成步骤：

1、合成MBHA树脂：取若干克MBHA树脂（如初始取代度为0.5mmol/g）和1倍树脂摩尔量的Fmoc-Linker-OH加入到反应器中，加入DMF，搅拌使氨基酸完全溶解。再加入树脂2倍量的DIEPA，搅拌混合均匀。再加入树脂0.95倍量的HBTU，搅拌混合均匀。反应3-4小时后，用DMF洗涤3次。用2倍树脂体积的10%乙酸酐/DMF 进行封端30分钟。然后再用DMF洗涤3次，甲醇洗涤2次，DCM洗涤2次，再用甲醇洗涤2次。真空干燥12小时以上，得到干燥的树脂{Fmoc-Linker-MHBA Resin}，测定取代度。这里测得取代度为 0.3mmol/g。结构如下图：

2、脱Fmoc：取1.23g的上述树脂，用DCM或DMF溶胀20分钟。用DMF洗涤2遍。加3倍树脂体积的20%Pip/DMF溶液，鼓氮气30分钟，然后2倍树脂体积的DMF 洗涤5次。得到 H2N-Linker-MBHA Resin 。（此步骤脱除Fmoc基团，茚三酮检测为蓝色，Pip为哌啶）。结构图如下：

3、缩合：取1.11mmol Fmoc-Glu(OtBu)-OH 氨基酸，加入到上述树脂里，加适当DMF溶解氨基酸，再依次加入2.21mmol DIPEA，1.05mmol HBTU。反应30分钟后，取小样洗涤，茚三酮检测为无色。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂。（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。得到Fmoc-Glu(OtBu)-Linker-MBHA Resin。氨基酸：DIPEA：HBTU：树脂=3：6：2.85：1（摩尔比）。结构图如下：

4、依次循环步骤二、步骤三，依次得到

H2N-Glu(OtBu)-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Phe-Glu(OtBu)-Linker-MBHA Resin

H2N-Phe-Glu(OtBu)-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Linker-MBHA Resin

H2N-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Phe-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Linker-MBHA Resin

H2N-Phe-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Glu(OtBu)-Phe-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Linker-MBHA Resin

H2N-Glu(OtBu)-Phe-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Phe-Glu(OtBu)-Phe-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Linker-MBHA Resin

H2N-Phe-Glu(OtBu)-Phe-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Phe-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Linker-MBHA Resin

H2N-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Phe-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Phe-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Phe-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Linker-MBHA Resin

H2N-Phe-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Phe-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Gly-Phe-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Phe-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Linker-MBHA Resin

H2N-Gly-Phe-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Phe-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Gly-Gly-Phe-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Phe-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Linker-MBHA Resin

H2N-Gly-Gly-Phe-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Phe-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Pro-Gly-Gly-Phe-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Phe-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Linker-MBHA Resin

H2N-Pro-Gly-Gly-Phe-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Phe-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Ser(tBu)-Pro-Gly-Gly-Phe-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Phe-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Linker-MBHA Resin

H2N-Ser(tBu)-Pro-Gly-Gly-Phe-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Phe-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Gly-Ser(tBu)-Pro-Gly-Gly-Phe-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Phe-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Linker-MBHA Resin

H2N-Gly-Ser(tBu)-Pro-Gly-Gly-Phe-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Phe-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Asp(OtBu)-Gly-Ser(tBu)-Pro-Gly-Gly-Phe-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Phe-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Linker-MBHA Resin

H2N-Asp(OtBu)-Gly-Ser(tBu)-Pro-Gly-Gly-Phe-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Phe-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Arg(Pbf)-Asp(OtBu)-Gly-Ser(tBu)-Pro-Gly-Gly-Phe-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Phe-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Linker-MBHA Resin

H2N-Arg(Pbf)-Asp(OtBu)-Gly-Ser(tBu)-Pro-Gly-Gly-Phe-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Phe-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Gly-Arg(Pbf)-Asp(OtBu)-Gly-Ser(tBu)-Pro-Gly-Gly-Phe-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Phe-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Linker-MBHA Resin

以上中间结构，均可在专肽生物多肽计算器-多肽结构计算器中，一键画出。

最后再经过步骤二得到 H2N-Gly-Arg(Pbf)-Asp(OtBu)-Gly-Ser(tBu)-Pro-Gly-Gly-Phe-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Phe-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Linker-MBHA Resin，结构如下：

5、乙酸酐反应连接：在上述树脂中，加入适当DMF后，再加入1.11mmol乙酸酐到树脂中，再加入2.21mmol DIPEA，鼓氮气反应30分钟。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。 得到Ac-Gly-Arg(Pbf)-Asp(OtBu)-Gly-Ser(tBu)-Pro-Gly-Gly-Phe-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Phe-Lys(Boc)-Phe-Glu(OtBu)-Linker-MBHAResin。 结构如下：

6、切割：6倍树脂体积的切割液（或每1g树脂加8ml左右的切割液），摇床摇晃 2小时，过滤掉树脂，用冰无水乙醚沉淀滤液，并用冰无水乙醚洗涤沉淀物3次，最后将沉淀物放真空干燥釜中，常温干燥24小试，得到粗品Ac-Gly-Arg-Asp-Gly-Ser-Pro-Gly-Gly-Phe-Lys-Phe-Glu-Phe-Lys-Phe-Glu-NH2。结构图见产品结构图。

切割液选择：1）TFA：H2O=95%：5%

2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%

3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5%：5%：2.5%：2.5%：2.5%

（前两种适合没有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三种适合几乎所有的序列。）

7、纯化冻干：使用液相色谱纯化，收集目标峰液体，进行冻干，获得蓬松的粉末状固体多肽。不过这时要取小样复测下纯度 是否目标纯度。

8、最后总结：

杭州专肽生物技术有限公司（ALLPEPTIDE https://www.allpeptide.com）主营定制多肽合成业务，提供各类长肽，短肽，环肽，提供各类修饰肽，如：荧光标记修饰（CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等），功能基团修饰肽（叠氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等），同位素标记肽（N15、C13），订书肽（Stapled Peptide）,脂肪酸修饰肽（Pal、Myr、Ste），磷酸化修饰肽（P-Ser、P-Thr、P-Tyr），环肽（酰胺键环肽、一对或者多对二硫键环），生物素标记肽，PEG修饰肽，甲基化修饰肽等。

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