| 编号: | 203155 |
| 中文名称: | 四肽叠氮乙酸-Leu-Leu-Leu-Leu |
| 单字母: | N3Gly-LLLL-OH |
| 三字母: | N3Gly N端叠氮乙酸修饰 -Leu亮氨酸 -Leu亮氨酸 -Leu亮氨酸 -Leu亮氨酸 -OHC端羧基 |
| 氨基酸个数: | 4 |
| 分子式: | C26H47N7O6 |
| 平均分子量: | 553.69 |
| 精确分子量: | 553.36 |
| 等电点(PI): | - |
| pH=7.0时的净电荷数: | - |
| 平均亲水性: | -1.8 |
| 疏水性值: | 3.8 |
| 外观与性状: | 粉末状固体 |
| 消光系数: | - |
| 来源: | 人工化学合成，仅限科学研究使用，不得用于人体。 |
| 储存条件: | 负80℃至负20℃ |
| 标签: | 叠氮化修饰肽 |
专肽生物提供多种叠氮化修饰类型，以满足丰富的多肽研究。
1、叠氮乙酸，常标记于N端
2、叠氮丙酸，常标记于N端
3、叠氮丁酸，常标记于N端
4、叠氮戊酸，常标记于N端
5、叠氮己酸，常标记于N端
6、N3-PEGn-COOH，常见的为N3-PEG2-COOH、N3-PEG4-COOH、N3-PEG6-COOH，常标记于N端
若在C端添加赖氨酸，以上6种均可添加到赖氨酸的侧链，以实现多肽C端叠氮化修饰。
7、H2N-PEGn-N3，常见的H2N-PEG2-N3、H2N-PEG4-N3、H2N-PEG6-N3，常标记于C端。
以下展示下多肽标记的大致结构。
1、
2、
3、
4、
5、
6、如N3-PEG2-COOH修饰
7、如H2N-PEG4-N3修饰
多肽N3Gly-Leu-Leu-Leu-Leu-COOH的合成步骤：
1、合成CTC树脂：称取2.12g CTC Resin（如初始取代度约为0.95mmol/g）和2.42mmol Fmoc-Leu-OH于反应器中，加入适量DCM溶解氨基酸（需要注意，此时CTC树脂体积会增大好几倍，避免DCM溶液过少），再加入6.04mmol DIPEA（Mw：129.1,d：0.740g/ml），反应2-3小时后，可不抽滤溶液，直接加入1ml的HPLC级甲醇，封端半小时。依次用DMF洗涤2次，甲醇洗涤1次，DCM洗涤一次，甲醇洗涤一次，DCM洗涤一次，DMF洗涤2次（这里使用甲醇和DCM交替洗涤，是为了更好地去除其他溶质，有利于后续反应）。得到 Fmoc-Leu-CTC Resin。结构图如下：
2、脱Fmoc：加3倍树脂体积的20%Pip/DMF溶液，鼓氮气30分钟，然后2倍树脂体积的DMF 洗涤5次。得到 H2N-Leu-CTC Resin 。（此步骤脱除Fmoc基团，茚三酮检测为蓝色，Pip为哌啶）。结构图如下：
3、缩合：取6.04mmol Fmoc-Leu-OH 氨基酸，加入到上述树脂里，加适当DMF溶解氨基酸，再依次加入12.08mmol DIPEA，5.74mmol HBTU。反应30分钟后，取小样洗涤，茚三酮检测为无色。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂。（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。得到Fmoc-Leu-Leu-CTC Resin。氨基酸：DIPEA：HBTU：树脂=3：6：2.85：1（摩尔比）。结构图如下：
4、依次循环步骤二、步骤三，依次得到
H2N-Leu-Leu-CTC Resin
Fmoc-Leu-Leu-Leu-CTC Resin
H2N-Leu-Leu-Leu-CTC Resin
Fmoc-Leu-Leu-Leu-Leu-CTC Resin
以上中间结构，均可在专肽生物多肽计算器-多肽结构计算器中，一键画出。
最后再经过步骤二得到 H2N-Leu-Leu-Leu-Leu-CTC Resin，结构如下：
5、叠氮乙酸反应连接：在上述树脂中，加入适当DMF后，再加入6.04mmol 叠氮乙酸到树脂中，再加入12.08mmol DIPEA、5.74mmol HBTU，鼓氮气反应30分钟。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。 得到N3Gly-Leu-Leu-Leu-Leu-CTCResin。 结构如下：
6、切割：6倍树脂体积的切割液（或每1g树脂加8ml左右的切割液），摇床摇晃 2小时，过滤掉树脂，用冰无水乙醚沉淀滤液，并用冰无水乙醚洗涤沉淀物3次，最后将沉淀物放真空干燥釜中，常温干燥24小试，得到粗品N3Gly-Leu-Leu-Leu-Leu-COOH。结构图见产品结构图。
切割液选择：1）TFA：H2O=95%：5%
2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%
3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5%：5%：2.5%：2.5%：2.5%
（前两种适合没有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三种适合几乎所有的序列。）
6、纯化冻干：使用液相色谱纯化，收集目标峰液体，进行冻干，获得蓬松的粉末状固体多肽。不过这时要取小样复测下纯度 是否目标纯度。
7、最后总结：
杭州专肽生物技术有限公司（ALLPEPTIDE https://www.allpeptide.com）主营定制多肽合成业务，提供各类长肽，短肽，环肽，提供各类修饰肽，如：荧光标记修饰（CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等），功能基团修饰肽（叠氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等），同位素标记肽（N15、C13），订书肽（Stapled Peptide）,脂肪酸修饰肽（Pal、Myr、Ste），磷酸化修饰肽（P-Ser、P-Thr、P-Tyr），环肽（酰胺键环肽、一对或者多对二硫键环），生物素标记肽，PEG修饰肽，甲基化修饰肽
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