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摘要: 本文设计可活化细胞穿膜肽 (activatable cell-penetrating peptide, ACPP), 对合成的 ACPP 进行酶解研究。ACPP 由 3 部分连接而成, 寡聚阴离子序列肽-基质金属蛋白酶 (matrix metalloproteinase, MMP) 的底物肽-寡聚阳离子序列肽。采用反相高效液相色谱 (reversed-phase high performance liquid chromatography, RP-HPLC) 监测 37 ℃条件下 IV 型胶原酶 (含 MMP-2 和 MMP-9) 对 ACPP 的酶解过程。收集酶解成分进行基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 (matrix assisted laser desorption ionization orthogonal time of flight mass spectrometry, MALDIO-TOF-MS) 检测, 比对推测酶解碎片的序列。结果表明, ACPP 可被 IV 型胶原酶裂解, 释放出寡聚阳离子序列肽, 即细胞穿膜肽 (cell-penetrating peptide, CPP), ACPP 裂解一半的时间约为 4 h。酶解发生于目标位点, 但不排除 ACPP 裂解后肽段的再次断裂。

摘要: 本研究的目的是制备 T7 肽修饰的载长春新碱低密度脂蛋白 (T7 peptide modified vincristine loaded low densitylipoprotein, T7-LDL-VCR) 纳米粒, 用于血脑屏障 (blood brain barrier, BBB) 和脑肿瘤细胞双级靶向药物递送。首先通过超速离心法从人血浆中提取 LDL 纳米粒, 然后采用干膜法将药物载入纳米粒脂质内核, 再将 T7 肽共价修饰于纳米粒表面, 表征其粒径、包封率和靶头连接效率。以 DiR 为探针, 通过活体成像观察T7-LDL-VCR 纳米粒在荷脑胶质瘤小鼠脑部中的分布情况, 通过核磁共振成像 (magnetic resonance imaging, MRI) 观察纳米粒对脑胶质瘤的治疗作用, 最后对小鼠的相对肿瘤体积和生存曲线进行测定。结果表明: 制备的T7-LDL-VCR 纳米粒粒径约 30 nm, 包封率为 30.1%, T7-VCR-LDL 的靶头连接效率为 63.88%; 在小鼠体内的脑靶向性及对脑胶质瘤治疗作用良好: T7-VCR-LDL、LDL-VCR 和 VCR 的相对肿瘤体积分别为 30%, 51.50% 和79.25%; 中位生存期为 36 天, 高于 VCR-LDL 1.38 倍、游离 VCR 1.85 倍和对照组 2 倍。本研究表明, T7-LDL-VCR具有 BBB 和脑肿瘤细胞双级靶向能力, 是一种有前景的靶向治疗制剂。

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