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天然肽 AAKIQASFRGHMARKK（27173）是源自神经颗粒素（天然存在的蛋白激酶 C 底物）序列的合成蛋白激酶 C 底物。该肽被证实是具有良好特异性的蛋白激酶 C 底物。它可被纯化的蛋白激酶 C 磷酸化，米氏常数为 150 纳摩尔。未报道该肽被蛋白激酶 A 或钙调蛋白激酶 2 显著磷酸化。将 36 位的精氨酸替换为异亮氨酸会导致对蛋白激酶 C 的亲和力显著降低。将 30 位的赖氨酸替换为精氨酸可提高对蛋白激酶 C 的催化效率（Vmax/Km），但会降低底物对蛋白激酶 C 的选择性。一般认为，磷酸化丝氨酸两侧的碱性氨基酸是蛋白激酶 C 底物中的重要结构决定簇。此外，特定碱性氨基酸（精氨酸与赖氨酸）的存在也可能影响底物对蛋白激酶 C 的选择性程度。

The native peptide AAKIQASFRGHMARKK (27173) is a synthetic PKC substrate derived from the sequence of neurogranin, a naturally occurring PKC substrate. The peptide is proven to be a PKC substrate with quite good specificity. It is phosphorylated by purified PKC with a Km of 150 nM. No significant phosphorylation of the peptide by either PKA or by CaMK 2 is reported. Substituting Arg36 with Ile causes a significant reduction in the affinity for PKC. Replacing Lys30 with Arg enhances the catalytic efficiency (Vmax/Km) for PKC but diminishes the selectivity of the substrate for PKC. It is generally considered that basic amino acids on both sides of the phosphorylated Ser are important structural determinants in PKC substrates. In addition, the presence of particular basic amino acids (Arg vs Lys) may also contribute to the degree of selectivity of a substrate for PKC.

生物素可以与亲和素或者链霉亲和素有力结合，结合强度甚至接近共价键。生物素标记的肽通常用于免疫测定，组织细胞化学和基于荧光的流式细胞术。标记的抗生物素抗体也可以用来结合生物素化多肽。生物素标记常连接在赖氨酸侧链或者N末端。通常在多肽和生物素之间使用6-氨基己酸作为纽带，纽带能够灵活结合底物，并且在有空间位阻的情况下能结合地更好。专肽生物根据需求，向客户提供具有不同位点生物素标记多肽的定制合成。

专肽生物合成用于蛋白质-蛋白质相互作用研究的生物素化肽。尽管生物素可以在 N 端或 C 端引入（通过赖氨酸残基），但我们建议使用 N 端修饰，因为它成本低、成功率高、周转时间短且易于操作。因为多肽合成是从 C 端到 N 端合成的，因此，N 端修饰是 SPPS步骤的最后一步，不需要额外的特定缩合步骤。相比之下，C 端修饰需要额外的步骤，并且通常更复杂。当然，原则上生物素可以定位在任何地方。

生物素可以通过多种不同的接头或间隔物与肽分离。尽管如此，还是建议包含一个灵活的间隔物，例如 Ahx（一个 6 碳接头），以使生物素标签更加稳定或灵活。

专肽生物在 N 端或 C 端提供生物素化：生物素-N 端、赖氨酸-生物素-肽中间和赖氨酸-生物素-C 端。
专肽生物还可以使用 Ahx 接头或长碳 (LC) 接头提供生物素化：生物素-Ahx-N 末端、Lys-Ahx-生物素-肽中间、Lys-Ahx-生物素-C-末端。

（生物素结构）

示例：
GRGDS在N端和C端标记生物素的结构展示。

1、GRGDS在N端标记生物素，不增加Ahx 接头

2、GRGDS在N端标记生物素，增加一个Ahx 接头

3、GRGDS在C端标记生物素，不增加Ahx 接头

4、GRGDS在C端标记生物素，增加一个Ahx 接头。