来源于单纯疱疹病毒 (HSV) 糖蛋白 B 的免疫显性表位，对应其 498-505 残基序列，可作为 H-2Kb 限制性和 HSV-1/2 交叉反应性细胞毒性 T 淋巴细胞 (CTL) 识别表位。
编号：200622
CAS号：149997-91-1
单字母：H2N-SSIEFARL-OH
HSV-gB2 (498-505) 是来源于单纯疱疹病毒 (HSV) 糖蛋白 B 的免疫显性表位，对应其 498-505 残基序列，可作为 H-2Kb 限制性和 HSV-1/2 交叉反应性细胞毒性 T 淋巴细胞 (CTL) 识别表位。
HSV-gB2 (498-505) is an immunodominant epitope from herpes simplex virus (HSV) glycoprotein B residues 498-505, acts as H-2Kb-restricted and HSV-1/2-cross-reactive cytotoxic T-lymphocyte (CTL) recognition epitope.
背景
糖蛋白B（485-492）的化学式为C41H67N11O13，氨基酸序列为H2N-Ser-Ser-Ile-Glu-Phe-Ala-Arg-Leu-OH，分子量为922.04。糖蛋白B是一种病毒糖蛋白，参与单纯疱疹病毒（HSV）进入细胞的过程。疱疹病毒含有一个包被和一个外脂质双层，其中包含12个表面糖蛋白。单纯疱疹病毒包被与细胞膜融合，经过内吞作用，双链DNA基因组进入宿主细胞，产生感染(1)。疱疹病毒糖蛋白B是所有细胞膜糖蛋白中最高度保守的，主要作为融合蛋白。gB和gH/ gL的精确功能未知，但它们对于病毒进入细胞是必须的，构成核心融合单位。糖蛋白B的胞质域内的某些突变引起显著的合胞体表型(2)，且与其它病毒融合蛋白具有结构同源性，由此认为gB参与了融合过程(3)。
参考文献：
1. PereiraL, Ali M, Kousoulas K, Huo B, Banks T (September 1989). "Domain structure of herpes simplex virus 1 glycoprotein B: neutralizing epitopes map in regions of continuous and discontinuous residues". Virology 172 (1): 11–24.
2. Bender FC, Samanta M, Heldwein EE, de Leon MP, Bilman E, Lou H, Whitbeck JC, Eisenberg RJ, Cohen GH (April 2007). "Antigenic and mutational analyses of herpes simplex virus glycoprotein B reveal four functional regions". J. Virol. 81 (8): 3827–41.
3. Heldwein EE, Lou H, Bender FC, Cohen GH, Eisenberg RJ, Harrison SC (July 2006). "Crystalstructure of glycoprotein B from herpes simplex virus 1". Science 313 (5784): 217–20.
| DOI | 名称 | |
|---|---|---|
| 10.1006/viro.1993.1346 | Epitope specificity of H-2Kb-restricted, HSV-1-, and HSV-2-cross-reactive cytotoxic T lymphocyte clones | 下载 |
多肽H2N-Ser-Ser-Ile-Glu-Phe-Ala-Arg-Leu-COOH的合成步骤：
1、合成CTC树脂：称取2.96g CTC Resin（如初始取代度约为1.14mmol/g）和4.05mmol Fmoc-Leu-OH于反应器中，加入适量DCM溶解氨基酸（需要注意，此时CTC树脂体积会增大好几倍，避免DCM溶液过少），再加入10.12mmol DIPEA（Mw：129.1,d：0.740g/ml），反应2-3小时后，可不抽滤溶液，直接加入1ml的HPLC级甲醇，封端半小时。依次用DMF洗涤2次，甲醇洗涤1次，DCM洗涤一次，甲醇洗涤一次，DCM洗涤一次，DMF洗涤2次（这里使用甲醇和DCM交替洗涤，是为了更好地去除其他溶质，有利于后续反应）。得到 Fmoc-Leu-CTC Resin。结构图如下：
2、脱Fmoc：加3倍树脂体积的20%Pip/DMF溶液，鼓氮气30分钟，然后2倍树脂体积的DMF 洗涤5次。得到 H2N-Leu-CTC Resin 。（此步骤脱除Fmoc基团，茚三酮检测为蓝色，Pip为哌啶）。结构图如下：
3、缩合：取10.12mmol Fmoc-Arg(Pbf)-OH 氨基酸，加入到上述树脂里，加适当DMF溶解氨基酸，再依次加入20.25mmol DIPEA，9.62mmol HBTU。反应30分钟后，取小样洗涤，茚三酮检测为无色。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂。（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。得到Fmoc-Arg(Pbf)-Leu-CTC Resin。氨基酸：DIPEA：HBTU：树脂=3：6：2.85：1（摩尔比）。结构图如下：
4、依次循环步骤二、步骤三，依次得到
H2N-Arg(Pbf)-Leu-CTC Resin
Fmoc-Ala-Arg(Pbf)-Leu-CTC Resin
H2N-Ala-Arg(Pbf)-Leu-CTC Resin
Fmoc-Phe-Ala-Arg(Pbf)-Leu-CTC Resin
H2N-Phe-Ala-Arg(Pbf)-Leu-CTC Resin
Fmoc-Glu(OtBu)-Phe-Ala-Arg(Pbf)-Leu-CTC Resin
H2N-Glu(OtBu)-Phe-Ala-Arg(Pbf)-Leu-CTC Resin
Fmoc-Ile-Glu(OtBu)-Phe-Ala-Arg(Pbf)-Leu-CTC Resin
H2N-Ile-Glu(OtBu)-Phe-Ala-Arg(Pbf)-Leu-CTC Resin
Fmoc-Ser(tBu)-Ile-Glu(OtBu)-Phe-Ala-Arg(Pbf)-Leu-CTC Resin
H2N-Ser(tBu)-Ile-Glu(OtBu)-Phe-Ala-Arg(Pbf)-Leu-CTC Resin
Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ile-Glu(OtBu)-Phe-Ala-Arg(Pbf)-Leu-CTC Resin
以上中间结构，均可在专肽生物多肽计算器-多肽结构计算器中，一键画出。
最后再经过步骤二得到 H2N-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ile-Glu(OtBu)-Phe-Ala-Arg(Pbf)-Leu-CTC Resin，结构如下：
5、切割：6倍树脂体积的切割液（或每1g树脂加8ml左右的切割液），摇床摇晃 2小时，过滤掉树脂，用冰无水乙醚沉淀滤液，并用冰无水乙醚洗涤沉淀物3次，最后将沉淀物放真空干燥釜中，常温干燥24小试，得到粗品H2N-Ser-Ser-Ile-Glu-Phe-Ala-Arg-Leu-COOH。结构图见产品结构图。
切割液选择：1）TFA：H2O=95%：5%、TFA：H2O=97.5%：2.5%
2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%
3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5%：5%：2.5%：2.5%：2.5%
（前两种适合没有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三种适合几乎所有的序列。）
6、纯化冻干：使用液相色谱纯化，收集目标峰液体，进行冻干，获得蓬松的粉末状固体多肽。不过这时要取小样复测下纯度 是否目标纯度。
7、最后总结：
杭州专肽生物技术有限公司（ALLPEPTIDE https://www.allpeptide.com）主营定制多肽合成业务，提供各类长肽，短肽，环肽，提供各类修饰肽，如：荧光标记修饰（CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等），功能基团修饰肽（叠氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等），同位素标记肽（N15、C13），订书肽（Stapled Peptide）,脂肪酸修饰肽（Pal、Myr、Ste），磷酸化修饰肽（P-Ser、P-Thr、P-Tyr），环肽（酰胺键环肽、一对或者多对二硫键环），生物素标记肽，PEG修饰肽，甲基化修饰肽
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