RFRP3（人）醋酸盐是禽促性腺激素抑制激素的同源物，是NPFF1受体的激动剂（抑制毛喉素诱导的cAMP产生的IC50=0.7 nM）。人RFRP3可以通过抑制Ca2+动员，在体内和培养中有效抑制GNRH刺激的绵羊促性腺激素分泌。
编号：133884
CAS号：311309-27-0
单字母：H2N-VPNLPQRF-CONH2
| 编号: | 133884 |
| 中文名称: | 神经肽VF Neuro peptide VF(124-131)(human)、RFRP3 (human)、V-8-F-NH2 |
| 英文名: | Neuro peptide VF(124-131)(human)、RFRP3 (human)、V-8-F-NH2 |
| CAS号: | 311309-27-0 |
| 单字母: | H2N-VPNLPQRF-CONH2 |
| 三字母: | H2N N端氨基 -Val缬氨酸 -Pro脯氨酸 -Asn天冬酰胺 -Leu亮氨酸 -Pro脯氨酸 -Gln谷氨酰胺 -Arg精氨酸 -Phe苯丙氨酸 -CONH2C端酰胺化 |
| 氨基酸个数: | 8 |
| 分子式: | C45H72N14O10 |
| 平均分子量: | 969.14 |
| 精确分子量: | 968.56 |
| 等电点(PI): | - |
| pH=7.0时的净电荷数: | 1.97 |
| 平均亲水性: | -0.4 |
| 疏水性值: | -0.49 |
| 消光系数: | - |
| 来源: | 人工化学合成，仅限科学研究使用，不得用于人体。 |
| 储存条件: | 负80℃至负20℃ |
| 标签: | 其它激动剂多肽(Agonist Peptide) |
RFRP-3TFA以0.7nM的IC50有效抑制毛喉素诱导的cAMP的产生。Scatchard图分析显示，125I标记的hRFRP-3对表达大鼠OT7T022的CHO细胞的膜部分具有单一类高亲和力结合位点，Kd值和Bmax值分别为0.19nM和1.3pM。RFRP-3 TFA特异性刺激用新的孤儿7TMR OT7T022转染的细胞，它以高亲和力（Kd=0.19nM）与OT7T02结合作为特异性配体。RFRP-3（10-8至10-14M）单独对LH和FSH水平没有影响，但当它与GnRH联合使用时，LH和FSH的分泌会因联合使用而显著减少。
RFRP-3（神经肽VF（124-131））（人）TFA，一种人GnIH肽同源物，通过抑制Ca2+动员而成为促性腺激素分泌的有效抑制剂。RFRP-3（人）是一种NPFF1受体激动剂，它以0.7 nM的IC50抑制毛喉素诱导的cAMP的产生。
RFRP-3 TFA efficiently inhibits forskolin-induced production of cAMP with an IC50 of 0.7 nM. Scatchard-plot analysis shows that 125I-labelled hRFRP-3 has a single class of high-affinity binding sites for the membrane fractions of CHO cells expressing rat OT7T022, the Kd value and the Bmax values are 0.19 nM and 1.3 pM, respectively.RFRP-3 TFA specifically stimulate cells transfected with a new orphan 7TMR, OT7T022, it binds to OT7T022 as a specific ligand with high affinity (Kd= 0.19 nM).RFRP-3 (10-8 to 10-14M) has no effect on LH and FSH levels alone, but when it combines with GnRH, LH and FSH secretion is significantly reduced by the combination.
RFRP-3 (Neuropeptide VF(124-131))(human) TFA, a human GnIH peptide homolog, is a potent inhibitor of gonadotropin secretion by inhibiting Ca2+ mobilization. RFRP-3(human) is a NPFF1 receptor agonist, it inhibits forskolin-induced production of cAMP with an IC50 of 0.7 nM.
RFRP3（人）醋酸盐是禽促性腺激素抑制激素的同源物，是NPFF1受体的激动剂（抑制毛喉素诱导的cAMP产生的IC50=0.7 nM）。人RFRP3可以通过抑制Ca2+动员，在体内和培养中有效抑制GNRH刺激的绵羊促性腺激素分泌。
RFRP3 (human) acetate, a homolog of avian gonadotropin-inhibitory hormone, is an agonist of the NPFF1 receptor (IC50 = 0.7 nM for inhibition of forskolin-induced cAMP production). The human RFRP3 can effectively inhibit GNRH-stimulated gonadotropin secretion in sheep in vivo and in culture by inhibiting Ca2+ mobilization.
Iain J Clarke, et al. Potent action of RFamide-related peptide-3 on pituitary gonadotropes indicative of a hypophysiotropic role in the negative regulation of gonadotropin secretion. Endocrinology : https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18617613/
多肽H2N-Val-Pro-Asn-Leu-Pro-Gln-Arg-Phe-NH2的合成步骤：
1、合成MBHA树脂：取若干克的MBHA树脂（如初始取代度为0.5mmol/g）和1倍树脂摩尔量的Fmoc-Linker-OH加入到反应器中，加入DMF，搅拌使氨基酸完全溶解。再加入树脂2倍量的DIEPA，搅拌混合均匀。再加入树脂0.95倍量的HBTU，搅拌混合均匀。反应3-4小时后，用DMF洗涤3次。用2倍树脂体积的10%乙酸酐/DMF 进行封端30分钟。然后再用DMF洗涤3次，甲醇洗涤2次，DCM洗涤2次，再用甲醇洗涤2次。真空干燥12小时以上，得到干燥的树脂{Fmoc-Linker-MHBA Resin}，测定取代度。这里测得取代度为 0.3mmol/g。结构如下图：
2、脱Fmoc：取1.64g的上述树脂，用DCM或DMF溶胀20分钟。用DMF洗涤2遍。加3倍树脂体积的20%Pip/DMF溶液，鼓氮气30分钟，然后2倍树脂体积的DMF 洗涤5次。得到 H2N-Linker-MBHA Resin 。（此步骤脱除Fmoc基团，茚三酮检测为蓝色，Pip为哌啶）。结构图如下：
3、缩合：取1.48mmol Fmoc-Phe-OH 氨基酸，加入到上述树脂里，加适当DMF溶解氨基酸，再依次加入2.95mmol DIPEA，1.4mmol HBTU。反应30分钟后，取小样洗涤，茚三酮检测为无色。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂。（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。得到Fmoc-Phe-Linker-MBHA Resin。氨基酸：DIPEA：HBTU：树脂=3：6：2.85：1（摩尔比）。结构图如下：
4、依次循环步骤二、步骤三，依次得到
H2N-Phe-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Arg(Pbf)-Phe-Linker-MBHA Resin
H2N-Arg(Pbf)-Phe-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Phe-Linker-MBHA Resin
H2N-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Phe-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Pro-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Phe-Linker-MBHA Resin
H2N-Pro-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Phe-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Leu-Pro-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Phe-Linker-MBHA Resin
H2N-Leu-Pro-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Phe-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Asn(Trt)-Leu-Pro-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Phe-Linker-MBHA Resin
H2N-Asn(Trt)-Leu-Pro-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Phe-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Pro-Asn(Trt)-Leu-Pro-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Phe-Linker-MBHA Resin
H2N-Pro-Asn(Trt)-Leu-Pro-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Phe-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Val-Pro-Asn(Trt)-Leu-Pro-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Phe-Linker-MBHA Resin
以上中间结构，均可在专肽生物多肽计算器-多肽结构计算器中，一键画出。
最后再经过步骤二得到 H2N-Val-Pro-Asn(Trt)-Leu-Pro-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Phe-Linker-MBHA Resin，结构如下：
5、切割：6倍树脂体积的切割液（或每1g树脂加8ml左右的切割液），摇床摇晃 2小时，过滤掉树脂，用冰无水乙醚沉淀滤液，并用冰无水乙醚洗涤沉淀物3次，最后将沉淀物放真空干燥釜中，常温干燥24小试，得到粗品H2N-Val-Pro-Asn-Leu-Pro-Gln-Arg-Phe-NH2。结构图见产品结构图。
切割液选择：1）TFA：H2O=95%：5%
2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%
3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5%：5%：2.5%：2.5%：2.5%
（前两种适合没有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三种适合几乎所有的序列。）
6、纯化冻干：使用液相色谱纯化，收集目标峰液体，进行冻干，获得蓬松的粉末状固体多肽。不过这时要取小样复测下纯度 是否目标纯度。
7、最后总结：
杭州专肽生物技术有限公司（ALLPEPTIDE https://www.allpeptide.com）主营定制多肽合成业务，提供各类长肽，短肽，环肽，提供各类修饰肽，如：荧光标记修饰（CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等），功能基团修饰肽（叠氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等），同位素标记肽（N15、C13），订书肽（Stapled Peptide）,脂肪酸修饰肽（Pal、Myr、Ste），磷酸化修饰肽（P-Ser、P-Thr、P-Tyr），环肽（酰胺键环肽、一对或者多对二硫键环），生物素标记肽，PEG修饰肽，甲基化修饰肽
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