400-998-5282
专注多肽 服务科研
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The chromogenic substrate Z-GGL-pNA is used alone or in combination with other substrates as Suc-LLVY-AMC for measuring the chymotrypsin-like activity of the proteasome. Z-GGL-pNA is also cleaved by proteinase yscE (kexin), subtilisins, and neutral endope
编号：182898
CAS号：53046-98-3
单字母：Z-GGL-pNA
| 编号: | 182898 |
| 中文名称: | 三肽蛋白酶体底物：Z-Gly-Gly-Leu-对硝基苯胺 |
| 英文名: | Z-Gly-Gly-Leu-pNA |
| CAS号: | 53046-98-3 |
| 单字母: | Z-GGL-pNA |
| 三字母: | Cbz N端Cbz保护，苄氧羰基（Cbz，Z） -Gly甘氨酸：glycine。系统命名为 2-氨基乙酸。是编码氨基酸中没有旋光性的最简单的氨基酸，因具有甜味而得名。符号：G，Gly。 -Gly甘氨酸：glycine。系统命名为 2-氨基乙酸。是编码氨基酸中没有旋光性的最简单的氨基酸，因具有甜味而得名。符号：G，Gly。 -LeuL-亮氨酸：leucine。系统命名为(2S)-氨基-4-甲基戊酸。是编码氨基酸。是哺乳动物的必需氨基酸。符号：L，Leu。 -pNA对硝基苯胺 |
| 氨基酸个数: | 3 |
| 分子式: | C24H29O7N5 |
| 平均分子量: | 499.52 |
| 精确分子量: | 499.21 |
| 等电点(PI): | - |
| pH=7.0时的净电荷数: | - |
| 平均亲水性: | -1.8 |
| 疏水性值: | 1 |
| 消光系数: | - |
| 来源: | 人工化学合成，仅限科学研究使用，不得用于人体。 |
| 盐体系: | 可选TFA、HAc、HCl或其它 |
| 储存条件: | 负80℃至负20℃ |
| 标签: | pNA修饰肽 CBZ修饰肽 三肽 |
The chromogenic substrate Z-GGL-pNA is used alone or in combination with other substrates as Suc-LLVY-AMC for measuring the chymotrypsin-like activity of the proteasome. Z-GGL-pNA is also cleaved by proteinase yscE (kexin), subtilisins, and neutral endopeptidase 24.5.
Z-Gly-Gly-Leu-pNA is a peptide that is derived from the amino acid sequence of a basic protein. It can be used as a fluorescent probe to detect hydration and enhance the fluorescence of other proteins. Z-Gly-Gly-Leu-pNA has been shown to bind basic protein subunits with high affinity, forming a stable complex. This peptide has also been shown to hydrolyze in acidic pH, making it useful for detecting proteolytic activity. The optimum pH for this peptide is neutral, at around 7.5. This peptide can be solubilized by adding Triton X or Brij 35 detergent and stored at -20°C.
苄氧羰基 - 甘氨酸 - 甘氨酸 - 亮氨酸 - 对硝基苯胺是一种三肽底物，设计用于亮氨酸靶向蛋白酶。对硝基苯胺报告基团在水解后提供清晰光学输出。N 端保护提高检测稳定性。研究人员用其表征催化行为。
Z-Gly-Gly-Leu-pNA is a tripeptide substrate designed for leucine-targeting proteases. The pNA reporter provides clear optical output upon hydrolysis. N-terminal protection aids assay stability. Researchers use it to characterize catalytic behavior.
| DOI | 名称 | |
|---|---|---|
| 10.1016/j.bbrc.2004.05.098 | Delta12-Prostaglandin J2 inhibits the ubiquitin hydrolase UCH-L1 and elicits ubiquitin-protein aggregation without proteasome inhibition | 下载 |
| 10.1111/j.1471-4159.2004.02456.x | A single amino acid substitution in a proteasome subunit triggers aggregation of ubiquitinated proteins in stressed neuronal cells | 下载 |
| 10.1016/j.jneuroim.2006.07.018 | The role of the proteasome-ubiquitin pathway in regulation of the IFN-gamma mediated anti-VSV response in neurons | 下载 |
| 10.1002/0471140864.ps2106s25 | Purification of the eukaryotic 20S proteasome | 下载 |
| 10.1371/journal.pone.0037921 | Identification and characterisation of a novel acylpeptide hydrolase from Sulfolobus solfataricus: structural and functional insights | 下载 |
| 10.1111/febs.12610 | A novel class of bifunctional acylpeptide hydrolases--potential role in the antioxidant defense systems of the Antarctic fish Trematomus bernacchii | 下载 |
| 10.1042/bj2410129 | A high-molecular-mass neutral endopeptidase-24.5 from human lung | 下载 |
| 10.1248/cpb.33.1721 | New fluorogenic substrates for subtilisin | 下载 |
| 10.1016/s0006-291x(77)80196-4 | Intracellular serine protease from Bacillus subtilis. Structural comparison with extracellular serine proteases-subtilisins | 下载 |
| 10.1016/0003-2697(74)90169-9 | A new chromogenic substrate for subtilisin | 下载 |
| 10.1016/0014-5793(84)80104-0 | Vacuoles are not the sole compartments of proteolytic enzymes in yeast | 下载 |
| 10.1074/jbc.271.28.16455 | The antitumor drug aclacinomycin A, which inhibits the degradation of ubiquitinated proteins, shows selectivity for the chymotrypsin-like activity of the bovine pituitary 20 S proteasome | 下载 |
| 10.1021/je050303e | Systematic Measurements of Peptide Adsorption in Hydrophobic Chromatography | 下载 |
多肽Cbz-Gly-Gly-Leu-pNA的合成步骤：
1、合成CTC树脂：称取1.94g CTC Resin（如初始取代度约为0.94mmol/g）和2.19mmol Fmoc-Leu-OH于反应器中，加入适量DCM溶解氨基酸（需要注意，此时CTC树脂体积会增大好几倍，避免DCM溶液过少），再加入5.47mmol DIPEA（Mw：129.1,d：0.740g/ml），反应2-3小时后，可不抽滤溶液，直接加入1ml的HPLC级甲醇，封端半小时。依次用DMF洗涤2次，甲醇洗涤1次，DCM洗涤一次，甲醇洗涤一次，DCM洗涤一次，DMF洗涤2次（这里使用甲醇和DCM交替洗涤，是为了更好地去除其他溶质，有利于后续反应）。得到 Fmoc-Leu-CTC Resin。结构图如下：
2、脱Fmoc：加3倍树脂体积的20%Pip/DMF溶液，鼓氮气30分钟，然后2倍树脂体积的DMF 洗涤5次。得到 H2N-Leu-CTC Resin 。（此步骤脱除Fmoc基团，茚三酮检测为蓝色，Pip为哌啶）。结构图如下：
3、缩合：取5.47mmol Fmoc-Gly-OH 氨基酸，加入到上述树脂里，加适当DMF溶解氨基酸，再依次加入10.94mmol DIPEA，5.2mmol HBTU。反应30分钟后，取小样洗涤，茚三酮检测为无色。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂。（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。得到Fmoc-Gly-Leu-CTC Resin。氨基酸：DIPEA：HBTU：树脂=3：6：2.85：1（摩尔比）。结构图如下：
4、依次循环步骤二、步骤三，依次得到
H2N-Gly-Leu-CTC Resin
Fmoc-Gly-Gly-Leu-CTC Resin
以上中间结构，均可在专肽生物多肽计算器-多肽结构计算器中，一键画出。
最后再经过步骤二得到 H2N-Gly-Gly-Leu-CTC Resin，结构如下：
5、苯甲氧羰酰琥珀酰亚胺Cbz-Cl反应连接：在上述树脂中，加入适当DMF后，再加入5.47mmol 苯甲氧羰酰琥珀酰亚胺Cbz-Cl到树脂中，再加入10.94mmol DIPEA、5.2mmol HBTU，鼓氮气反应30分钟。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。 得到Cbz-Gly-Gly-Leu-CTC Resin。 结构如下：
6、全保护切割：配置0.5%TFA/DCM溶液，溶液体积约为树脂体积的3倍。再次用DCM洗涤树脂2遍（去除残留DMF），后将配置好的溶液倒入到反应器中，反应30分钟。抽滤树脂，收集滤液（此时多肽已经从树脂上分离，存在于滤液中）。多肽序列为 Cbz-Gly-Gly-Leu-CTC Resin。 在滤液中添加DIEPA，调PH至7-8。用饱和NaHCO3洗涤滤液，分离出DCM层溶液。可适当旋蒸DCM层溶液，减少有机溶剂。再次加入1或2倍体积的乙酸乙酯，用稀HCl溶液调PH至微酸性，将多肽从DCM层萃取到乙酸乙酯层。用饱和NaCl洗涤2次乙酸乙酯层。用无水硫酸镁吸收乙酸乙酯层的水分。通过减压旋蒸，直接将乙酸乙酯完全旋蒸掉，得到晶体状固体多肽，用于下一步C端反应。或通过减压旋蒸保留适量乙酸乙酯的溶液体积，加入冰乙醚析出 多肽，然后对多肽进行烘干操作即可用于下一步C端反应。Cbz-Gly-Gly-Leu-COOH的结构图如下。
7、4-硝基苯胺反应连接：在上述树脂中，加入适当DMF后，再加入5.47mmol 4-硝基苯胺到树脂中，再加入10.94mmol DIPEA、5.2mmol HBTU，鼓氮气反应30分钟。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。 得到 Cbz-Gly-Gly-Leu-pNA。 结构如下：
8、切割：6倍树脂体积的切割液（或每1g树脂加8ml左右的切割液），摇床摇晃 2小时，过滤掉树脂，用冰无水乙醚沉淀滤液，并用冰无水乙醚洗涤沉淀物3次，最后将沉淀物放真空干燥釜中，常温干燥24小试，得到粗品Cbz-Gly-Gly-Leu-pNA。结构图见产品结构图。
切割液选择：1）TFA：H2O=95%：5%
2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%
3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5%：5%：2.5%：2.5%：2.5%
（前两种适合没有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三种适合几乎所有的序列。）
9、纯化冻干：使用液相色谱纯化，收集目标峰液体，进行冻干，获得蓬松的粉末状固体多肽。不过这时要取小样复测下纯度 是否目标纯度。
10、最后总结：
杭州专肽生物技术有限公司（ALLPEPTIDE https://www.allpeptide.com）主营定制多肽合成业务，提供各类长肽，短肽，环肽，提供各类修饰肽，如：荧光标记修饰（CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等），功能基团修饰肽（叠氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等），同位素标记肽（N15、C13），订书肽（Stapled Peptide）,脂肪酸修饰肽（Pal、Myr、Ste），磷酸化修饰肽（P-Ser、P-Thr、P-Tyr），环肽（酰胺键环肽、一对或者多对二硫键环），生物素标记肽，PEG修饰肽，甲基化修饰肽等。
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